| 中文摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-25页 |
| ·NDV生物学性状 | 第14-16页 |
| ·形态特征 | 第14页 |
| ·理化特性 | 第14-15页 |
| ·培养特性 | 第15页 |
| ·毒力及致病性 | 第15-16页 |
| ·NDV基因组结构及其编码蛋白 | 第16-23页 |
| ·基因组结构 | 第16页 |
| ·NDV编码蛋白及其结构与功能 | 第16-23页 |
| ·HN蛋白 | 第17-19页 |
| ·F蛋白 | 第19-20页 |
| ·M蛋白 | 第20-21页 |
| ·核衣壳复合体 | 第21-22页 |
| ·V蛋白和W蛋白 | 第22-23页 |
| ·NDV检测技术 | 第23-24页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第23-24页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-46页 |
| ·材料 | 第25-30页 |
| ·毒株、鸡胚及抗鸭NDV血清 | 第25页 |
| ·细胞及Balb/c小鼠 | 第25页 |
| ·试验试剂及耗材 | 第25页 |
| ·质粒及受体菌 | 第25-27页 |
| ·主要试剂配制 | 第27-29页 |
| ·主要设备及仪器 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-46页 |
| ·鸭源NDV HN基因目的片段引物设计与RT-PCR扩增 | 第30-32页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·病毒的增殖 | 第30页 |
| ·RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·RT合成cDNA | 第31页 |
| ·PCR反应扩增HN基因 | 第31-32页 |
| ·重组质粒pET-28a-HN的构建及鉴定 | 第32-35页 |
| ·PCR产物纯化回收 | 第32页 |
| ·PCR产物与pMD18-T Vector的连接反应 | 第32页 |
| ·CaCl2法制备大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·菌液PCR鉴定及质粒的提取、测序 | 第33-34页 |
| ·构建pET-28a-HN重组表达载体及其测定 | 第34-35页 |
| ·重组质粒pET-28a-HN的诱导表达及鉴定 | 第35-39页 |
| ·诱导表达 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE分析重组蛋白存在形式 | 第35-36页 |
| ·最佳诱导表达条件的优化 | 第36-37页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第37-38页 |
| ·Western-blotting鉴定 | 第38页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第38-39页 |
| ·鸭源NDV抗体检测间接ELISA（HN-ELISA）方法的建立 | 第39-40页 |
| ·方阵法确定抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释度 | 第39页 |
| ·最佳抗原包被液的选择 | 第39页 |
| ·最佳抗原包被条件的确定 | 第39页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第39页 |
| ·特异性的试验 | 第39-40页 |
| ·ELISA与HI的比较 | 第40页 |
| ·鸭源NDV HN蛋白单克隆抗体的制备 | 第40-46页 |
| ·重组蛋白免疫BALB/c小鼠 | 第40页 |
| ·间接ELISA检测小鼠抗体水平 | 第40页 |
| ·细胞融合 | 第40-42页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选及亚克隆 | 第42-43页 |
| ·制备腹水及单克隆抗体亚类的鉴定 | 第43-45页 |
| ·IFA鉴定单克隆抗体的特异性 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-55页 |
| ·鸭源NDV HN蛋白原核表达载体的构建 | 第46-48页 |
| ·目的片段扩增 | 第46页 |
| ·重组载体pMD18-HN-T菌液PCR结果 | 第46-47页 |
| ·目的片段与空质粒pET-28a的双酶切 | 第47页 |
| ·重组质粒pET-28a-HN双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·目的片段HN基因序列测定与分析 | 第48页 |
| ·重组蛋白的鉴定分析 | 第48-51页 |
| ·重组蛋白表达条件优化结果 | 第48-49页 |
| ·重组蛋白的存在形式 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第50页 |
| ·Western-blotting分析鉴定 | 第50-51页 |
| ·BCA法测定纯化蛋白浓度 | 第51页 |
| ·间接ELISA（HN-ELISA）方法的建立 | 第51-52页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清最佳稀释度的确定 | 第51-52页 |
| ·最佳抗原包被条件的筛选 | 第52页 |
| ·ELISA特异性试验 | 第52页 |
| ·ELISA与HI的对比 | 第52页 |
| ·鸭源NDV HN蛋白单克隆抗体的制备 | 第52-55页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选及其稳定性 | 第52-53页 |
| ·培养液上清及腹水效价测定 | 第53页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第53-54页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第54页 |
| ·单克隆抗体特异性鉴定 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| ·原核表达载体pET-28a-HN的构建及表达 | 第55页 |
| ·间接ELISA（HN-ELISA）方法的建立 | 第55-56页 |
| ·鸭源NDV HN蛋白单克隆抗体的制备 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
