| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 英文缩略词表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 洋甘菊简介 | 第11-13页 |
| ·洋甘菊生物学特性 | 第11页 |
| ·洋甘菊栽培研究 | 第11-12页 |
| ·洋甘菊组织培养繁殖的研究 | 第12页 |
| ·洋甘菊化学成分研究 | 第12-13页 |
| ·洋甘菊药理作用研究 | 第13页 |
| 2 植物萜类合成途径的研究 | 第13-15页 |
| 3 角鲨烯合酶研究进展 | 第15-20页 |
| ·角鲨烯与角鲨烯合酶简介 | 第15-16页 |
| ·角鲨烯合酶结构研究 | 第16-17页 |
| ·角鲨烯合酶催化机制 | 第17-18页 |
| ·SQS国内外研究进展 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-21页 |
| 材料与方法 | 第21-33页 |
| 1 实验材料 | 第21页 |
| 2 主要试剂和仪器 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| 3 实验方法 | 第21-33页 |
| ·总RNA的提取及检测 | 第21-22页 |
| ·总RNA提取 | 第21-22页 |
| ·总RNA的检测 | 第22页 |
| ·cDNA第一链的获得 | 第22页 |
| ·角鲨烯合酶基因部分序列获得 | 第22-24页 |
| ·简并引物设计 | 第22-23页 |
| ·部分片段的扩增与回收 | 第23页 |
| ·连接与转化 | 第23-24页 |
| ·SQS基因RACE扩全长 | 第24-25页 |
| ·SQS基因RACE引物的设计 | 第24页 |
| ·3’-RACE cDNA第一链的合成 | 第24页 |
| ·5’-RACE cDNA第一链的合成 | 第24-25页 |
| ·SQS 3’端扩增 | 第25页 |
| ·SQS 5’端扩增 | 第25页 |
| ·SQS基因RACE结果拼接与ORF框预测 | 第25页 |
| ·SQS基因ORF框鉴定 | 第25页 |
| ·SQS基因生物信息学分析 | 第25-26页 |
| ·qRT-PCR检测洋甘菊SQS基因在不同器官的表达量 | 第26-27页 |
| ·SQS基因的原核表达 | 第27-31页 |
| ·SQS基因克隆菌的构建 | 第27页 |
| ·SQS基因表达菌的构建 | 第27-29页 |
| ·质粒提取 | 第27-28页 |
| ·目的片段与表达载体的双酶切 | 第28页 |
| ·目的片段与表达载体的连接 | 第28页 |
| ·重组质粒转化到表达菌株Transetta(DE3) | 第28-29页 |
| ·诱导表达 | 第29页 |
| ·蛋白质纯化 | 第29-30页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测蛋白 | 第30-31页 |
| ·蛋白样品处理 | 第30页 |
| ·试剂配制 | 第30页 |
| ·制胶及电泳 | 第30-31页 |
| ·体外酶功能检测 | 第31页 |
| ·体外酶促反应 | 第31页 |
| ·GC-MS分析酶促反应产物 | 第31页 |
| ·GC-MS分析洋甘菊各个器官中的挥发性物质 | 第31-33页 |
| 实验结果与分析 | 第33-54页 |
| 1 洋甘菊SQS基因的克隆 | 第33-36页 |
| ·洋甘菊RNA的鉴定 | 第33页 |
| ·洋甘菊SQS基因的克隆 | 第33-36页 |
| ·洋甘菊SQS基因部分片段的获得 | 第33-34页 |
| ·洋甘菊SQS基因RACE扩全长 | 第34-35页 |
| ·洋甘菊SQS基因拼接结果鉴定 | 第35-36页 |
| 2 生物信息学分析 | 第36-44页 |
| ·洋甘菊SQS基因序列分析 | 第36-37页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白二级机构分析 | 第37-38页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白信号肽分析 | 第38-39页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白跨膜分析 | 第39页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白疏水性分析 | 第39-40页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白保守域分析 | 第40页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白三级结构预测 | 第40-41页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白一致性分析 | 第41-43页 |
| ·洋甘菊SQS蛋白系统进化树分析 | 第43-44页 |
| 3 qRT-PCR分析洋甘菊SQS基因在不同器官中的表达量 | 第44-45页 |
| 4 SQS基因原核表达 | 第45-47页 |
| ·工程菌的构建 | 第45-46页 |
| ·诱导表达 | 第46-47页 |
| 5 酶功能检测 | 第47-49页 |
| 6 洋甘菊不同器官挥发油的化学成分GC-MS分析 | 第49-54页 |
| 讨论 | 第54-57页 |
| 1 洋甘菊SQS基因的研究价值 | 第54页 |
| 2 洋甘菊SQS基因的克隆与分析 | 第54页 |
| 3 洋甘菊SQS转录本积累量分析 | 第54-55页 |
| 4 洋甘菊SQS蛋白酶活分析 | 第55页 |
| 5 洋甘菊不同器官挥发油化学成分分析 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附表I | 第65-68页 |
| 附表II | 第68-69页 |
| 附表III | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 作者简介 | 第80页 |
| 硕士期间获得成果 | 第80页 |
