| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪言 | 第11-21页 |
| ·油茶概述 | 第11-12页 |
| ·油茶的分子生物学研究 | 第12-13页 |
| ·植物种子中油脂生物合成的基本途径及关键酶 | 第13-15页 |
| ·油脂合成肯尼迪(Kennedy)途径 | 第13页 |
| ·脂肪酸的合成途径中的关键酶 | 第13-15页 |
| ·国内外研究DGAT现状 | 第15-18页 |
| ·植物DGAT基因的分类 | 第15页 |
| ·DGAT蛋白和基因的结构特点 | 第15-16页 |
| ·DGAT基因的表达特异性 | 第16-17页 |
| ·DGAT的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·本项研究的目的意义、主要内容和技术路线 | 第18-21页 |
| 第二章 SOUTHERN杂交分析油茶DGAT1基因 | 第21-30页 |
| ·材料与方法 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·实验试剂 | 第21页 |
| ·实验设备 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-27页 |
| ·油茶总DNA提取 | 第22页 |
| ·制备Southern杂交用地高辛标记探针 | 第22-24页 |
| ·基因组DNA的Southern杂交 | 第24-27页 |
| ·结果与分析 | 第27-29页 |
| ·油茶基因组DNA的检测 | 第27页 |
| ·基因组DNA片段PCR扩增、回收、连接、转化 | 第27-28页 |
| ·地高辛标记的DNA探针PCR扩增 | 第28页 |
| ·DGAT1基因Southern杂交分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 油茶DGAT1基因亚细胞定位 | 第30-38页 |
| ·材料与方法 | 第30-31页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31-34页 |
| ·基因片段的制备 | 第31页 |
| ·构建融合表达载体pCXDG-CoDGAT1 | 第31-32页 |
| ·基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第32-34页 |
| ·结果与分析 | 第34-36页 |
| ·载体质粒提取检测和目的基因扩增结果 | 第34页 |
| ·pCXDG-CoDGAT1融合表达载体构建 | 第34-35页 |
| ·油茶DGAT1基因亚细胞定位 | 第35-36页 |
| ·结论 | 第36-38页 |
| 第四章 油茶DGAT1基因时空表达和油脂积累相关性分析 | 第38-47页 |
| ·材料和方法 | 第38-39页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·试验方法 | 第39-41页 |
| ·qPCR目的基因和内参基因引物设计 | 第39页 |
| ·油脂提取及脂肪酸成分测定 | 第39页 |
| ·碱式甲酯化法测定油茶脂肪酸成分 | 第39-40页 |
| ·油茶总RNA提取方法 | 第40页 |
| ·反转录cDNA | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-46页 |
| ·油茶DGAT1基因的qPCR产物 | 第41-42页 |
| ·DGAT1基因在种仁不同生长时期的表达特征 | 第42-43页 |
| ·DGAT1基因在不同器官的表达特征 | 第43-44页 |
| ·油茶不同发育时期种仁含油率及脂肪酸成分差异 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 第五章 油茶DGAT1基因转化拟南芥和烟草 | 第47-64页 |
| ·材料与方法 | 第47-48页 |
| ·材料 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-53页 |
| ·基因片段的制备 | 第48-49页 |
| ·构建植物表达载体pCAMBIA1304-CoDGAT1和pCXSN-CoDGAT1 | 第49页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第49-50页 |
| ·表达载体转化农杆菌 | 第50页 |
| ·农杆菌阳性克隆鉴定 | 第50页 |
| ·拟南芥培养 | 第50页 |
| ·烟草培养 | 第50-51页 |
| ·花粉管通道法转化拟南芥 | 第51页 |
| ·拟南芥转化子阳性鉴定 | 第51页 |
| ·农杆菌EHA105转化烟草和再生 | 第51-52页 |
| ·GUS染色 | 第52-53页 |
| ·微量油脂提取以及脂肪酸成分分析 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-63页 |
| ·带酶切位点CoDGAT1基因克隆 | 第53-54页 |
| ·植物表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·农杆菌阳性克隆鉴定 | 第55页 |
| ·转基因拟南芥阳性植株鉴定 | 第55-58页 |
| ·转基因拟南芥油脂含量测定和成分鉴定 | 第58-59页 |
| ·转基因烟草的获得及鉴定 | 第59-61页 |
| ·转基因烟草种子油脂含量测定和成分鉴定 | 第61-62页 |
| ·转基因烟草的性状表现 | 第62-63页 |
| ·讨论 | 第63-64页 |
| 第六章 总结 | 第64-66页 |
| ·结论 | 第64页 |
| ·创新点 | 第64-65页 |
| ·研究方向 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 附录A：常用实验药品配方 | 第73-75页 |
| 附录B：缩略词 | 第75-76页 |
| 附录C：攻读硕士学位期间的主要学术成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
