| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述与实验设计 | 第13-23页 |
| 第一章 绪论 | 第14-21页 |
| 第一节 疟疾疫苗的概述 | 第14-17页 |
| ·红前期疫苗 | 第15页 |
| ·红内期疫苗 | 第15-16页 |
| ·传播阻断疫苗 | 第16-17页 |
| ·展望 | 第17页 |
| 第二节 间日疟传播阻断疫苗 Pvs25 研究进展 | 第17-18页 |
| 第三节 杆状病毒研究进展 | 第18-21页 |
| ·家蚕核型多角体 BmNPV 表达载体系统 | 第18-19页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统的优势 | 第19页 |
| ·家蚕杆状病毒表面展示技术 | 第19-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的及意义 | 第21页 |
| 2 研究内容 | 第21-22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第二部分 研究论文 | 第23-63页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第24-29页 |
| 1 生物信息学分析工具 | 第24页 |
| 2 分析方法与结果 | 第24-29页 |
| ·Pvs25 基因序列 | 第24-25页 |
| ·CMV 的基因序列 | 第25页 |
| ·Pvs25 的疏水性分析 | 第25-26页 |
| ·Pvs25 的跨膜区预测 | 第26-27页 |
| ·Pvs25 的信号肽预测 | 第27页 |
| ·Pvs25 的二级结构预测 | 第27页 |
| ·Pvs25 的高级结构预测 | 第27-28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| 第二章 间日疟传播阻断候选抗原 Pvs25 的原核表达 | 第29-41页 |
| 1 材料和试剂 | 第29-32页 |
| ·材料和试剂 | 第29页 |
| ·试剂配制 | 第29-32页 |
| 2 方法 | 第32-38页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第32-33页 |
| ·PCR 产物与 pET-32a 载体的双酶切 | 第33页 |
| ·酶切产物回收 | 第33页 |
| ·Pvs25 基因和 pET-32a 质粒连接反应 | 第33-34页 |
| ·Rosetta 和 TG1 感受态细胞的制备 | 第34页 |
| ·连接产物的转化 | 第34页 |
| ·重组阳性克隆的鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组菌的表达 | 第35-37页 |
| ·重组质粒的转化 | 第35页 |
| ·重组表达载体在大肠杆菌中的表达 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第35页 |
| ·融合蛋白 Pvs25 的表达的 Western Blotting 鉴定 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白 Pvs25 的大量表达和 Ni 柱纯化 | 第36-37页 |
| ·目的蛋白定量和浓缩 | 第37页 |
| ·多克隆鼠抗的制备 | 第37-38页 |
| ·免疫动物 | 第37页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第37页 |
| ·抗体纯化 | 第37页 |
| ·抗体效价测定 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-40页 |
| ·Pvs25 基因的 PCR 扩增和表达载体 pET-32a-Pvs25 的构建 | 第38-39页 |
| ·pET-32a-Pvs25 的原核表达鉴定 | 第39页 |
| ·pET-32a-Pvs25 的原核表达纯化 | 第39-40页 |
| ·多克隆抗体的效价测定 | 第40页 |
| 4 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 间日疟传播阻断候选抗原 Pvs25 在家蚕杆状病毒系统中的表达 | 第41-50页 |
| 1 材料与试剂 | 第41-42页 |
| ·材料与试剂 | 第41页 |
| ·试剂配制 | 第41-42页 |
| 2 方法 | 第42-46页 |
| ·重组质粒 pFastBacHTB-Pvs25 的构建 | 第42页 |
| ·Pvs25 片段的 PCR 扩增 | 第42页 |
| ·pFastBacHTB 和 Pvs25 片段的双酶切 | 第42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·重组病毒基因组 Bacmid-BmPvs25 的构建 | 第42-44页 |
| ·DH10Bac 感受态的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒的转化 | 第42-43页 |
| ·重组 Bacmid 的提取 | 第43页 |
| ·重组 Bacmid 的鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组病毒 vBmPvs25 的构建 | 第44-45页 |
| ·重组病毒基因组通过脂质体介导法转染家蚕 BmN 细胞 | 第44-45页 |
| ·重组病毒的 PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·重组病毒的扩增以及病毒滴度测定 | 第45页 |
| ·重组蛋白 Pvs25 在家蚕 BmN 细胞中的表达和鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白 Pvs25 在家蚕五龄幼虫中的表达和鉴定 | 第46页 |
| ·重组病毒 vBmPvs25 感染家蚕五齡幼虫 | 第46页 |
| ·Western Blotting 鉴定融合蛋白 Pvs25 的表达 | 第46页 |
| 3 结果与分析 | 第46-49页 |
| ·重组质粒 pFastBacHTB –Pvs25 的构建的鉴定 | 第46页 |
| ·重组病毒 vBmPvs25 的鉴定 | 第46-47页 |
| ·Western Blotting 鉴定 Pvs25 蛋白在家蚕细胞中的表达情况 | 第47-48页 |
| ·Western Blotting 鉴定 Pvs25 在家蚕幼虫中的表达 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 Pvs25 蛋白的杆状病毒表面展示的研究 | 第50-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第50页 |
| ·材料与试剂 | 第50页 |
| 2 方法 | 第50-55页 |
| ·引物设计与 Pvs25 基因的获得 | 第50-51页 |
| ·重组质粒 pFastBacDual-CMV-SP-TM 的获得 | 第51页 |
| ·重组质粒 pFastBacDual-CMV-SP-Pvs25-TM 的构建 | 第51-52页 |
| ·重组病毒基因组 Bacmid-CMV-gp64-Pvs25 的构建 | 第52-53页 |
| ·DH10Bac 菌感受态的制备 | 第52页 |
| ·重组质粒的转化 | 第52页 |
| ·重组 Bacmid 的提取 | 第52页 |
| ·重组 Bacmid PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·重组病毒 vBmCMV-gp64-Pvs25 的构建 | 第53-54页 |
| ·重组病毒基因组通过脂质体介导法转染家蚕 BmN 细胞 | 第53页 |
| ·重组病毒的基因组提取以及 PCR 鉴定 | 第53-54页 |
| ·重组病毒的扩增和重组病毒滴度测定 | 第54页 |
| ·目的蛋白 Pvs25 在家蚕 BmN 细胞中的表达和鉴定 | 第54页 |
| ·重组病毒 vBmCMV-gp64-Pvs25 感染家蚕 BmN 细胞 | 第54页 |
| ·Western Blotting 鉴定蛋白表达 | 第54页 |
| ·重组病毒 vBmCMV-gp64-Pvs25 的大量扩增 | 第54页 |
| ·重组病毒粒子的纯化 | 第54页 |
| ·免疫细胞方法检测 vBmCMV-gp64-Pvs25 在家蚕细胞中的表达 | 第54-55页 |
| ·纯化的重组病毒粒子免疫小鼠 | 第55页 |
| ·抗体的效价测定 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-61页 |
| ·重组质粒 pFastBacDualCMV-gp64-SP-Pvs25-TM 的构建 | 第55-57页 |
| ·PCR 扩增 Pvs25 完整的 ORF 序列结果 | 第55-56页 |
| ·重组供体质粒 pFastBacDualCMV-gp64-SP-Pvs25-TM 的鉴定 | 第56-57页 |
| ·重组 Bacmid PCR 鉴定 | 第57页 |
| ·重组病毒 vBmCMV-gp64-Pvs25 的鉴定 | 第57-58页 |
| ·Western Blotting 鉴定 Pvs25 蛋白在家蚕细胞中的表达 | 第58-59页 |
| ·免疫细胞方法检测 Pvs25 蛋白在家蚕细胞中的表达 | 第59-60页 |
| ·抗体的效价测定 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
