| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-10页 |
| 引言 | 第10-17页 |
| 1.蚕豆脆化草鱼及其对饲养动物肉质的影响 | 第10-11页 |
| 2. Ⅰ型胶原研究概述 | 第11页 |
| 3. TGF-β/Smads 信号转导通路概述及其在鱼类中的研究 | 第11-14页 |
| ·TGF-β/Smads 信号转导通路的主要成员 | 第12-13页 |
| ·TGF-β/Smads 通路的信号转导机制 | 第13页 |
| ·TGF-β/Smads 通路的生物学效应研究 | 第13-14页 |
| 4.反义基因的研究发展 | 第14页 |
| 5.研究目的和意义 | 第14-15页 |
| 6.研究内容 | 第15-17页 |
| 第一章 草鱼 Smad4 基因的克隆、生物信息学分析及其反义真核载体的构建 | 第17-27页 |
| 1 实验材料 | 第18页 |
| ·试验鱼 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| 2 实验方法 | 第18-21页 |
| ·总 RNA 提取与 cDNA 的合成 | 第18页 |
| ·草鱼 Smad4 基因 cDNA 全序列克隆 | 第18-19页 |
| ·草鱼 Smad4 基因的生物信息学分析 | 第19页 |
| ·Smad4 基因 ORF 片段的获得与鉴定 | 第19页 |
| ·带酶切位点的 Smad4 基因 ORF 片段的获得与鉴定 | 第19-20页 |
| ·反义真核表达载体的构建 | 第20页 |
| ·重组载体的 PCR 检测和酶切鉴定 | 第20-21页 |
| 3 实验结果 | 第21-24页 |
| ·草鱼 Smad4 基因 cDNA 全序列及推导的氨基酸序列分析 | 第21页 |
| ·草鱼与其他生物 Smad4 蛋白氨基酸序列的相似性比较和进化树分析 | 第21-22页 |
| ·Smad4 蛋白疏水性分析 | 第22-23页 |
| ·Smad4 蛋白二级结构特征和功能结构域预测 | 第23-24页 |
| ·重组质粒构建与 PCR 鉴定和酶切鉴定 | 第24页 |
| 4 讨论 | 第24-27页 |
| 第二章 TGF-β/Smads 信号通路对草鱼脆化过程中Ⅰ型胶原表达的调控研究 | 第27-37页 |
| 1 材料和方法 | 第27-28页 |
| ·实验鱼 | 第27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-31页 |
| ·RNA 提取和反转录 | 第28页 |
| ·荧光定量 PCR | 第28-30页 |
| ·western blot 检测相关蛋白表达 | 第30-31页 |
| ·蛋白样品的制备 | 第30页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶电泳 | 第30页 |
| ·转膜 | 第30页 |
| ·封闭 | 第30页 |
| ·免疫反应 | 第30-31页 |
| ·显影 | 第31页 |
| ·统计学处理 | 第31页 |
| 3 结果分析 | 第31-35页 |
| ·RNA 提取结果 | 第31页 |
| ·Ⅰ型胶原α1 表达变化 | 第31-32页 |
| ·Ⅰ型胶原α2 表达变化 | 第32-33页 |
| ·TGF-β 1 表达变化 | 第33-34页 |
| ·Smad2 表达变化 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 反义载体阻断 TGF-β /Smads 信号通路后草鱼Ⅰ型胶原的表达变化 | 第37-42页 |
| 1.实验材料 | 第37-38页 |
| ·实验鱼 | 第37页 |
| ·实验器材 | 第37页 |
| ·实验试剂及配方 | 第37-38页 |
| 2.实验方法 | 第38-39页 |
| ·RNA 提取 | 第38页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第38-39页 |
| ·荧光定量 PCR 检测基因 mRNA 表达水平 | 第39页 |
| ·western blot 检测样品中目的蛋白含量 | 第39页 |
| 3.实验结果 | 第39-40页 |
| ·反义 Smad4 载体对 Smad4 蛋白的表达影响 | 第39页 |
| ·反义 Smad4 载体对Ⅰ型胶原α 1 表达的影响 | 第39-40页 |
| ·反义 Smad4 载体对Ⅰ型胶原α 2 表达的影响 | 第40页 |
| 4.讨论 | 第40-42页 |
| 全文总结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-51页 |
| 附录 A 常用试剂与缓冲液的配制 | 第51-52页 |
| 附录 B 缩略词表 | 第52-53页 |
| 附录 C 在读期间拟发表的文章 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
