构建和表达抗HSV-2单链抗体和碱性磷酸酶的融合蛋白
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 缩写说明 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-25页 |
| ·单纯疱疹病毒Ⅱ型与生殖器疱疹 | 第14页 |
| ·单链抗体及其应用 | 第14-16页 |
| ·单链抗体简介 | 第14-15页 |
| ·单链抗体的应用 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌原核表达 | 第16-17页 |
| ·可溶性表达及包涵体表达 | 第16-17页 |
| ·提高可溶性表达的方法 | 第17页 |
| ·包涵体复性 | 第17-22页 |
| ·包涵体的形成 | 第17-18页 |
| ·包涵体的可利用之处 | 第18页 |
| ·复性的概念 | 第18页 |
| ·影响复性的因素 | 第18-20页 |
| ·复性的主要方法 | 第20-22页 |
| ·研究计划 | 第22-25页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23页 |
| ·拟突破难点 | 第23-24页 |
| ·创新点 | 第24-25页 |
| 第二章 建立碱性磷酸酶比活标准对照 | 第25-39页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株 | 第25-26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-35页 |
| ·pET43.1-AKP的可溶性表达 | 第29页 |
| ·金属螯合层析纯化AKP | 第29-30页 |
| ·12%SDS-PAGE电泳 | 第30-33页 |
| ·AKP储存液透析AKP | 第33页 |
| ·AKP比活测定 | 第33-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·AKP可溶表达的定位 | 第35-36页 |
| ·AKP金属螯合层析纯化效果 | 第36-37页 |
| ·AKP比活测定 | 第37-38页 |
| ·比活计算 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第三章 融合表达载体pLac-H3-AKP的构建 | 第39-49页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·实验材料 | 第39-41页 |
| ·菌株及质粒 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39-40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-46页 |
| ·pLac-duet-1-AKP的扩增 | 第41-42页 |
| ·pCANTAB5E-H3的扩增 | 第42-43页 |
| ·两个质粒的双酶切 | 第43-44页 |
| ·双酶切产物的琼脂糖凝胶电泳 | 第44页 |
| ·基因片段的凝胶回收 | 第44-45页 |
| ·基因片段的连接 | 第45页 |
| ·pLac-H3-AKP的双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 融合蛋白的表达 | 第49-57页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·实验材料 | 第49-50页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49-50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·pLac-H3-AKP表达菌的构建 | 第50页 |
| ·融合蛋白的可溶性表达尝试 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白的包涵体表达 | 第51页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第51页 |
| ·包涵体的变性 | 第51-52页 |
| ·变性融合蛋白的金属螯合层析 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-56页 |
| ·融合蛋白的可溶性表达 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白的包涵体表达 | 第53-54页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第54页 |
| ·变性融合蛋白的金属螯合层析 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 融合蛋白的复性 | 第57-64页 |
| ·引言 | 第57页 |
| ·实验材料 | 第57-58页 |
| ·主要试剂 | 第57页 |
| ·主要仪器 | 第57-58页 |
| ·实验方法 | 第58-59页 |
| ·复性条件的筛选 | 第58页 |
| ·复性后融合蛋白的分析鉴定 | 第58-59页 |
| ·结果与分析 | 第59-63页 |
| ·不同pH值对复性效果的影响 | 第59页 |
| ·不同初始复性蛋白浓度对复性效果的影响 | 第59-60页 |
| ·不同GSSG/GSH比例对复性效果的影响 | 第60-61页 |
| ·不同时间对复性效果的影响 | 第61页 |
| ·8%SDS-PAGE分析 | 第61-62页 |
| ·抗原结合活性鉴定 | 第62-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 附录 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
