致谢 | 第1-8页 |
摘要 | 第8-10页 |
文献综述 | 第10-19页 |
1 白介素-2 研究进展 | 第11-14页 |
·IL-2的发现与命名 | 第11页 |
·IL-2受体的研究 | 第11-12页 |
·IL-2的来源与作用机理 | 第12-13页 |
·IL-2的种属特异性 | 第13页 |
·IL-2的生物学活性 | 第13-14页 |
·IL-2的应用 | 第14页 |
2 白介素-6 的研究进展 | 第14-19页 |
·IL-6的发现与命名 | 第15页 |
·IL-6受体的研究 | 第15-16页 |
·IL-6的来源与作用机理 | 第16-17页 |
·IL-6的生物学活性 | 第17-18页 |
·IL-6作为免疫增强剂的研究 | 第18-19页 |
前言 | 第19-20页 |
试验一 猪白细胞介素6基因的克隆、表达及活性研究 | 第20-36页 |
1 材料与方法 | 第20-29页 |
·材料 | 第20-22页 |
·菌种和质粒 | 第20页 |
·主要试剂与试剂盒 | 第20-21页 |
·主要溶液的配制 | 第21-22页 |
·方法 | 第22-29页 |
·PoIL-6 基因的克隆与表达载体的构建 | 第22-27页 |
·PoIL-6基因在大肠杆菌表达系统中的表达及鉴定 | 第27页 |
·PoIL-6蛋白的纯化制备 | 第27-28页 |
·ELISA 方法检测 rPoIL-6 蛋白免疫反应活性 | 第28页 |
·MTS 法检测 rPoIL-6 脾淋巴细胞增殖活性 | 第28-29页 |
2 结果 | 第29-34页 |
·目的基因的 PCR 扩增 | 第29页 |
·DNA 快速回收试剂盒回收 PoIL-6 PCR 产物 | 第29-30页 |
·pGEM-T Easy/ PoIL-6 质粒的 PCR 鉴定和双酶切鉴定 | 第30-31页 |
·pQE30/ PoIL-6 质粒的 PCR 鉴定和双酶切鉴定 | 第31-32页 |
·测序 | 第32页 |
·rPoIL-6蛋白的表达与纯化 | 第32-33页 |
·rPoIL-6 蛋白特异性免疫反应活性检测 | 第33-34页 |
·rPoIL-6 蛋白促猪脾脏淋巴母细胞增殖活性 | 第34页 |
3.结论与讨论 | 第34-36页 |
试验二 猪白细胞介素2/6嵌合基因的构建及融合表达 | 第36-49页 |
1 材料与方法 | 第36-43页 |
·材料 | 第36-38页 |
·细胞株和质粒 | 第36页 |
·主要试剂与试剂盒 | 第36-37页 |
·主要溶液的配制 | 第37-38页 |
·方法 | 第38-43页 |
·PoIL-2-linker-PoIL-6嵌合基因的构建 | 第38-42页 |
·PoIL-2-linker-PoIL-6 基因在大肠杆菌表达系统中的融合表达及鉴定 | 第42页 |
·PoIL-2-linker-PoIL-6 蛋白的纯化制备 | 第42-43页 |
2 结果 | 第43-47页 |
·PoIL-2-Linker和Linker-PoIL-6基因的扩增 | 第43-44页 |
·目的基因的 PCR 扩增及产物的回收 | 第44页 |
·rpGEM-T Easy/PoIL-2-linker-PoIL-6 质粒的鉴定 | 第44-45页 |
·rpQE30/ PoIL-2-linker-PoIL-6 的质粒鉴定 | 第45-46页 |
·测序结果 | 第46页 |
·PoIL-2-linker-PoIL-6的融合表达与纯化 | 第46-47页 |
3 结论与讨论 | 第47-49页 |
试验三 rPoIL-2-linker-PoIL-6 蛋白的体外活性研究 | 第49-56页 |
1 材料与方法 | 第49-51页 |
·材料 | 第49页 |
·方法 | 第49-51页 |
·ELISA 方法检测 rPoIL-2-linker-PoIL-6 中的 PoIL-2 蛋白免疫反应活性 | 第49-50页 |
·ELISA 方法检测 pQE30/PoIL-2-linker-PoIL-6 中的 PoIL-6 蛋白免疫反应活性 | 第50页 |
·MTS 法检测 PoIL-2-linker-PoIL-6 蛋白促猪外周血 T 淋巴细胞增殖活性 | 第50-51页 |
·MTS 法检测 PoIL-2-linker-PoIL-6 蛋白促猪脾脏淋巴细胞增殖活性 | 第51页 |
2 结果 | 第51-54页 |
·间接 ELISA 检测重组 PQE30/PoIL-2-linker-PoIL-6 中的 PoIL-2 蛋白活性 | 第51-52页 |
·间接 ELISA 检测重组 PQE30/PoIL-2-linker-PoIL-6 中的 PoIL-6 蛋白活性 | 第52-53页 |
·rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪外周血T淋巴细胞增殖活性 | 第53页 |
·rPoIL-2-linker-PoIL-6蛋白促猪脾脏淋巴细胞增殖活性 | 第53-54页 |
3 结论与讨论 | 第54-56页 |
参考文献 | 第56-64页 |
Abstract | 第64-66页 |
发表论文 | 第66页 |