| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-26页 |
| ·TLR信号通路 | 第12-16页 |
| ·TLR受体与哺乳动物天然免疫 | 第12-13页 |
| ·TLR受体与信号通路 | 第13-14页 |
| ·TLR4受体的配体与TLR4信号通路 | 第14-16页 |
| ·NF-κB信号概述 | 第16-19页 |
| ·NF-κB简介 | 第16页 |
| ·NF-κB信号通路 | 第16-18页 |
| ·NF-κB信号与人类疾病 | 第18-19页 |
| ·脂多糖结合蛋白(LBP)研究背景 | 第19-22页 |
| ·脂多糖结合蛋白(LBP)的分布和空间结构 | 第19-20页 |
| ·LBP的功能 | 第20-22页 |
| ·过氧化物酶-4(Peroxiredoxin4,Prx-4)的研究背景 | 第22-24页 |
| ·Peroxiredoxin(Prx)家族 | 第22-23页 |
| ·Prx4的分布和空间结构 | 第23-24页 |
| ·Prx4的功能 | 第24页 |
| ·本论文研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第26-50页 |
| ·材料 | 第26-32页 |
| ·菌株,细胞系和质粒 | 第26-28页 |
| ·引物 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·主要缓冲液 | 第30-32页 |
| ·仪器和设备 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-50页 |
| ·琼脂糖凝胶回收目的DNA片段 | 第32-33页 |
| ·SDS碱裂解法制备质粒DNA | 第33-37页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第38-39页 |
| ·MAGIC克隆方法快速构建重组杆状病毒载体 | 第39-40页 |
| ·昆虫细胞Sf9的传代与培养 | 第40页 |
| ·昆虫细胞Sf9的冻存与活化 | 第40-41页 |
| ·昆虫细胞Sf9的转染及杆状病毒粒子的收集与扩增 | 第41页 |
| ·目的蛋白在杆状病毒-昆虫细胞Sf9中的表达 | 第41-42页 |
| ·哺乳动物细胞HEK293T细胞的传代和培养 | 第42页 |
| ·哺乳动物细胞HEK293T细胞的冻存 | 第42-43页 |
| ·哺乳动物细胞HEK293T冻存细胞的活化 | 第43页 |
| ·哺乳动物细胞的转染 | 第43页 |
| ·SDS-PAGE检测蛋白质的表达 | 第43-45页 |
| ·免疫印记检测表达蛋白 | 第45-46页 |
| ·GST-pull down技术 | 第46-48页 |
| ·免疫共沉淀技术 | 第48页 |
| ·间接免疫焚光共定位技术 | 第48-50页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第50-63页 |
| ·TLRs信号途径相关蛋白相互作用候选蛋白的筛选 | 第50页 |
| ·基于杆状病毒-昆虫表达系统的GST pull-down表达载体的构建 | 第50-58页 |
| ·供体质粒pMAGIC-HIS-LBP和pMAGIC-GST-LBP的构建 | 第50-52页 |
| ·供体质粒pMAGIC-HIS-Prx4和pMAGIC-GST-Prx4的构建 | 第52-54页 |
| ·利用接合转移(MAGIC)快速构建重组杆状病毒载体 | 第54-58页 |
| ·LBP和Prx4在昆虫细胞Sf9中的表达 | 第58-59页 |
| ·GST pull-down实验离体证实LBP与Prx4间的相互作用 | 第59-60页 |
| ·免疫共沉淀实验证明LBP与Prx4间的相互作用 | 第60-61页 |
| ·LBP与Prx4共定位于细胞质中 | 第61-62页 |
| ·Prx4在昆虫细胞Sf9中的大量表达和纯化 | 第62-63页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第63-67页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| ·展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 硕士期间科研成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
