| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 上篇 文献综述 | 第13-31页 |
| 第一章 微管蛋白的研究进展以及与禾谷镰孢菌抗药性水平的关系 | 第14-24页 |
| 1 微管及微管蛋白研究进展 | 第14-21页 |
| ·微管及微管蛋白的分子结构 | 第14-17页 |
| ·微管的分子结构 | 第14-15页 |
| ·微管蛋白的一级结构和性质 | 第15-16页 |
| ·微管相关蛋白 | 第16-17页 |
| ·微管的动力学特征 | 第17-19页 |
| ·微管的解聚组装模型 | 第17-18页 |
| ·微管的相互滑动学说 | 第18页 |
| ·微管蛋白之间的聚合和解聚 | 第18-19页 |
| ·微管的功能 | 第19-21页 |
| ·支架作用 | 第19-20页 |
| ·细胞内运输 | 第20页 |
| ·形成纺锤体 | 第20页 |
| ·纤毛与鞭毛的运动 | 第20-21页 |
| 2 禾谷镰孢菌抗药性水平与微管蛋白结构的关系 | 第21-24页 |
| ·苯并咪唑类杀菌剂作用机制 | 第21-22页 |
| ·不同真菌对苯并咪唑类杀菌剂的抗性机制 | 第22页 |
| ·禾谷镰孢菌对MBC抗药性机制研究进展 | 第22-24页 |
| 第二章 单克隆抗体及其在植物病理学中的应用 | 第24-31页 |
| 1 抗体的基本结构和特性 | 第24-25页 |
| 2 单克隆抗体制备技术 | 第25-27页 |
| ·单克隆抗体技术的基本概念和原理 | 第25-26页 |
| ·单克隆抗体技术基本流程 | 第26页 |
| ·单克隆抗体技术的发展 | 第26-27页 |
| ·融合技术的改进 | 第26-27页 |
| ·人—人杂交瘤技术和杂交—杂交瘤技术的发展 | 第27页 |
| ·单链抗体技术的发展 | 第27页 |
| 3 单克隆抗体在植物病理学中的应用 | 第27-28页 |
| 4 应用单克隆抗体的免疫诊断方法 | 第28-31页 |
| ·凝集反应(Agglutination) | 第28页 |
| ·沉淀反应(Precipitation) | 第28-29页 |
| ·免疫荧光显微技术(Immunofluorescence Technique) | 第29-30页 |
| ·直接荧光法(direct fluorescent antibody method,FA) | 第29页 |
| ·间接荧光法(indirect fluorescent antibody method,IFA) | 第29页 |
| ·补体结合免疫荧光法 | 第29页 |
| ·流式细胞术(Flow Cytometry,FCM) | 第29-30页 |
| ·酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA) | 第30页 |
| ·放射免疫测定法(Radioimmunoassay,RIA) | 第30页 |
| ·免疫印迹法(Immunoblotting) | 第30-31页 |
| 下篇 研究内容 | 第31-60页 |
| 第一章 禾谷镰孢菌β-微管蛋白基因的克隆及在原核细胞中的表达 | 第32-40页 |
| 摘要 | 第32页 |
| Abstract | 第32-33页 |
| 1 材料和方法 | 第33-35页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·供试菌株、质粒及宿主菌 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·寡核苷酸引物设计与合成 | 第34页 |
| ·禾谷镰孢菌总RNA的提取及RT-PCR | 第34页 |
| ·重组β_1-S/pET28a,β_2-S/pET28a,β_2-MR/pET28a,β_2-HR/pET28a质粒的构建 | 第34-35页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的表达及可溶性分析 | 第35页 |
| ·亲和层析纯化融合蛋白 | 第35页 |
| ·禾谷镰孢菌微管蛋白的Western blot鉴定 | 第35页 |
| 2 结果与分析 | 第35-38页 |
| ·RT-PCR扩增结果 | 第35页 |
| ·重组质粒β_1-S/T,β_2-S/T,β_2-MR/T,β_2-HR/T验证及序列验证 | 第35-37页 |
| ·β_1-S/pET28a,β_2-S/pET28a,β_2-MR/pET28a,β_2-HR/pET28a重组质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·重组质粒的表达和可溶性分析 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的纯化及Western blot鉴定 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第二章 对多菌灵敏感的禾谷镰孢菌菌株的β_2-微管蛋白的复性和纯化 | 第40-50页 |
| 摘要 | 第40页 |
| Abstract | 第40-41页 |
| 1 材料和方法 | 第41-43页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·供试菌株、表达载体和宿主菌 | 第41页 |
| ·主要仪器及试剂 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·MBC~S菌株(ZF43)的β_2-tub基因的克隆及表达载体的构建 | 第41页 |
| ·β_2-S/pET28a/Rosseta表达菌株在大肠杆菌中的表达 | 第41-42页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第42页 |
| ·包涵体的复性 | 第42页 |
| ·包涵体的纯化 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-47页 |
| ·包涵体洗涤 | 第43-44页 |
| ·两种包涵体复性方法的比较 | 第44页 |
| ·三种包涵体纯化方法的比较 | 第44-47页 |
| ·His-Trap Hp预装柱纯化 | 第44-45页 |
| ·离子交换纯化法 | 第45-46页 |
| ·PD-10重力柱纯化法 | 第46-47页 |
| 3 讨论 | 第47-50页 |
| 第三章 禾谷镰孢菌MBC~S菌株ZF-43的β_2微管蛋白单克隆抗体的制备 | 第50-60页 |
| 摘要 | 第50页 |
| Abstract | 第50-51页 |
| 1 材料与方法 | 第51-55页 |
| ·实验材料 | 第51-52页 |
| ·菌株和细胞株 | 第51页 |
| ·实验动物 | 第51页 |
| ·主要试剂 | 第51页 |
| ·主要仪器 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-55页 |
| ·抗原的制备 | 第52页 |
| ·小鼠免疫 | 第52页 |
| ·Sp2/0骨髓瘤细胞的复苏和收集 | 第52-53页 |
| ·小鼠脾细胞的制备 | 第53页 |
| ·脾细胞与骨髓瘤细胞融合 | 第53页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第53-54页 |
| ·阳性杂交瘤细胞株的克隆和保存 | 第54页 |
| ·细胞冻存和复苏 | 第54页 |
| ·单克隆抗体的大量制备和粗纯 | 第54-55页 |
| ·单克隆抗体的特异性检测 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-58页 |
| ·抗原的制备 | 第55-56页 |
| ·小鼠免疫结果 | 第56页 |
| ·融合率和阳性率检测 | 第56-57页 |
| ·单克隆抗体的特异性检测 | 第57-58页 |
| ·Western Blot检测 | 第57页 |
| ·间接ELISA检测 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
