| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-18页 |
| 缩略词 | 第18-19页 |
| 1 绪论 | 第19-59页 |
| ·引言 | 第19-21页 |
| ·稻瘟病菌侵染机理研究进展 | 第21-46页 |
| ·稻瘟病菌的侵染循环 | 第21-23页 |
| ·稻瘟病菌附着胞的形成 | 第23-25页 |
| ·稻瘟病菌附着胞发育相关的代谢途径 | 第25-29页 |
| ·细胞周期调控稻瘟病菌附着胞的发育 | 第29-31页 |
| ·细胞自噬对稻瘟病菌附着胞发育的影响 | 第31-33页 |
| ·信号传导途径在稻瘟病菌发育过程中的作用 | 第33-46页 |
| ·绿僵菌侵染机理研究进展 | 第46-59页 |
| ·绿僵菌侵染寄主昆虫的过程 | 第46-47页 |
| ·绿僵菌附着胞的形成 | 第47-50页 |
| ·绿僵菌对寄主体壁的穿透机制 | 第50-55页 |
| ·绿僵菌对寄主血淋巴的适应机制 | 第55-59页 |
| 2 稻瘟病菌 MoVAC8 和 MoTSC13 的基因功能研究 | 第59-121页 |
| ·研究背景 | 第59-60页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第60-62页 |
| ·研究内容 | 第60-61页 |
| ·技术路线 | 第61-62页 |
| ·材料与方法 | 第62-90页 |
| ·供试菌株 | 第62页 |
| ·主要仪器设备 | 第62页 |
| ·主要试剂、培养基及溶液配制 | 第62-65页 |
| ·稻瘟病菌的培养 | 第65-66页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备与转化 | 第66-67页 |
| ·大肠杆菌化学感受态细胞的制备和转化 | 第67-68页 |
| ·质粒的提取 | 第68-69页 |
| ·酵母同源重组介导的载体构建 | 第69-73页 |
| ·Split-Marker 方法敲除稻瘟病菌基因 MoVAC8、MoTSC13 及 MoATG4 | 第73-75页 |
| ·CTAB 法提取稻瘟病菌基因组 DNA | 第75-76页 |
| ·稻瘟病菌总 RNA 的提取 | 第76页 |
| ·基因组 DNA southern 杂交 | 第76-78页 |
| ·稻瘟病菌菌落生长及产孢量的测定 | 第78页 |
| ·MoVAC8:GFP 融合表达载体的构建 | 第78-80页 |
| ·MoTSC13:GFP 融合表达载体的构建 | 第80页 |
| ·MoVAC8SH4:GFP 融合表达载体的构建 | 第80-81页 |
| ·MoVAC8:GFP 融合表达载体的基因定点突变 | 第81-82页 |
| ·附着胞的诱导与观察 | 第82页 |
| ·附着胞膨胀压的测定 | 第82-83页 |
| ·穿透钉的观察 | 第83页 |
| ·稻瘟病菌致病能力的分析 | 第83-84页 |
| ·稻瘟病菌液泡膜和囊泡膜的 FM4-64 染色观察 | 第84页 |
| ·稻瘟病菌细胞核的 DAPI 染色观察和细胞壁的 CFW 染色观察 | 第84页 |
| ·稻瘟病菌细胞核的荧光蛋白标记 | 第84-85页 |
| ·荧光显微镜观察荧光标记 | 第85页 |
| ·RT-PCR 扩增 MoVAC8 和 MoTSC13 cDNA 序列 | 第85-87页 |
| ·酵母功能互补载体 pYES2-MoVAC8 和 pYES2-MoTSC13 的构建 | 第87-88页 |
| ·MoVAC8:yEGFP 和 MoTSC13:yEGFP 融合表达载体的构建 | 第88-89页 |
| ·酵母转化子的表型分析 | 第89页 |
| ·酵母液泡膜、囊泡膜的 FM4-64 染色观察和细胞核的 DAPI 染色观察 | 第89-90页 |
| ·结果和分析 | 第90-119页 |
| ·MoVAC8 和 MoTSC13 蛋白结构分析 | 第90-94页 |
| ·MoVAC8 和 MoTSC13 蛋白的细胞定位及时空表达特征 | 第94-97页 |
| ·MoVAC8 和 MoTSC13 基因在酵母细胞中的表达与功能分析 | 第97-101页 |
| ·MoVAC8:GFP 和 MoTSC13:GFP 表达菌株的细胞核荧光观察 | 第101-102页 |
| ·MoVAC8 和 MoTSC13 基因缺失突变体的构建 | 第102-104页 |
| ·野生型稻瘟病菌、突变体⊿Movac8 和⊿Motsc13 的细胞核荧光观察 | 第104-107页 |
| ·突变体⊿Movac8 和⊿Motsc13 的表型分析 | 第107-110页 |
| ·MoVAC8 N 末端 SH4 结构域的功能分析 | 第110-116页 |
| ·突变体⊿Moatg1 和⊿Moatg4 的细胞核荧光观察 | 第116-118页 |
| ·⊿Moatg1 突变体细胞液泡和内质网的荧光观察 | 第118-119页 |
| ·讨论 | 第119-121页 |
| ·VAC8 和 TSC13 基因在不同物种中的功能分化 | 第119-120页 |
| ·稻瘟病菌细胞核等细胞器的降解依赖于非选择性细胞自噬 | 第120-121页 |
| 3 稻瘟病菌 MoTOR2 基因在细胞自噬过程中的功能研究 | 第121-185页 |
| ·研究背景 | 第121-123页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第123-125页 |
| ·研究内容 | 第123-124页 |
| ·技术路线 | 第124-125页 |
| ·材料与方法 | 第125-137页 |
| ·供试菌株 | 第125页 |
| ·主要试剂、培养基及溶液配制 | 第125页 |
| ·LD-PCR 扩增稻瘟病菌 MoTOR2 全长基因 | 第125-126页 |
| ·RACE 扩增 MoTOR2 cDNA 序列 | 第126页 |
| ·启动子融合表达载体 Ptor2:GFP 的构建 | 第126-127页 |
| ·MoTOR2 基因表达水平的定量 PCR 分析 | 第127-128页 |
| ·雷帕霉素处理稻瘟病菌 | 第128页 |
| ·稻瘟病菌胞内糖原和脂滴的染色观察 | 第128-129页 |
| ·自噬体的荧光观察 | 第129页 |
| ·MoCYC1:RFP 融合表达菌株的构建 | 第129-130页 |
| ·MoTOR2 基因 RNAi 干扰菌株的构建 | 第130-131页 |
| ·RNAi 干扰菌株中 MoTOR2 基因表达水平的定量 PCR 分析 | 第131页 |
| ·附着胞发育阶段细胞自噬性凋亡的定量测定 | 第131-132页 |
| ·RNAi 干扰菌株毒力的测定 | 第132页 |
| ·酵母互补载体 p425GPD-MoLST8 及 p425GPD-yEGFP:MoLST8 的构建 | 第132页 |
| ·MoLST8 互补载体在酵母细胞中的表达 | 第132-133页 |
| ·MoTOR2 和 MoLST8 附着胞特异性超表达菌株的构建 | 第133-135页 |
| ·超表达菌株中 MoTOR2 和 MoLST8 基因表达水平的定量 PCR 分析 | 第135页 |
| ·超表达菌株的表型分析 | 第135页 |
| ·Split-Marker 方法敲除稻瘟病菌的 MoFKBP12 基因 | 第135页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第135-136页 |
| ·酵母双杂交报告基因表达的检测 | 第136-137页 |
| ·结果和分析 | 第137-179页 |
| ·MoTOR2 编码蛋白的同源性分析 | 第137-140页 |
| ·MoTOR2 基因的时空表达分析 | 第140-141页 |
| ·MoFKBP12 基因缺失突变体的构建与功能分析 | 第141-148页 |
| ·MoFKBP12 蛋白与 MoTOR2 蛋白 FRB 结构域之间的相互作用 | 第148-150页 |
| ·雷帕霉素对稻瘟病菌营养菌丝生长的影响 | 第150-152页 |
| ·雷帕霉素对稻瘟病菌附着胞形成的影响 | 第152页 |
| ·雷帕霉素对稻瘟病菌附着胞发育阶段营养物质动员的影响 | 第152-155页 |
| ·雷帕霉素对稻瘟病菌附着胞发育阶段细胞周期的影响 | 第155-159页 |
| ·雷帕霉素对稻瘟病菌附着胞发育阶段细胞自噬的影响 | 第159-161页 |
| ·MoTOR2 基因 RNAi 干扰菌株的构建 | 第161-164页 |
| ·RNAi 干扰菌株中 MoTOR2 基因表达水平的定量 PCR 分析 | 第164-166页 |
| ·MoTOR2 基因的 RNAi 干扰对稻瘟病菌生长发育的影响 | 第166-170页 |
| ·MoLST8 基因在酵母细胞中的功能同源性分析 | 第170-172页 |
| ·附着胞特异的 MoLST8 及 MoTOR2 超表达菌株的构建 | 第172-175页 |
| ·超表达菌株中 MoLST8 和 MoTOR2 基因表达水平的定量 PCR 分析 | 第175-176页 |
| ·MoLST8 及 MoTOR2 的超表达对侵染相关细胞自噬的影响 | 第176-179页 |
| ·讨论 | 第179-185页 |
| ·雷帕霉素与 MoFKBP12 蛋白形成复合体后结合至 MoTOR2 蛋白 | 第179页 |
| ·MoTOR2 基因调控稻瘟病菌的营养生长与侵染相关的生理过程 | 第179-182页 |
| ·MoTOR2 基因调控侵染相关的自噬和孢子细胞的自噬性凋亡 | 第182-185页 |
| 4 稻瘟病菌 MoATG1 基因在细胞自噬过程中的功能研究 | 第185-211页 |
| ·研究背景 | 第185-188页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第188-189页 |
| ·研究内容 | 第188页 |
| ·技术路线 | 第188-189页 |
| ·材料与方法 | 第189-195页 |
| ·供试菌株 | 第189页 |
| ·GFP:MoATG1 融合表达载体的构建 | 第189-190页 |
| ·mRFP:MoATG8 融合表达载体的构建 | 第190-191页 |
| ·H1:GFP 融合表达载体的构建 | 第191-192页 |
| ·MoATG1 基因定点突变载体的构建 | 第192-195页 |
| ·自噬体、细胞核及液泡在 MoATG1 基因定点突变体中的荧光观察 | 第195页 |
| ·结果和分析 | 第195-209页 |
| ·GFP:MoATG1 融合蛋白的细胞定位及附着胞发育阶段的变化 | 第195-199页 |
| ·MoATG1 基因定点突变体的构建 | 第199-203页 |
| ·MoATG1 蛋白的激酶活性对稻瘟病菌自噬及致病性的影响 | 第203-209页 |
| ·讨论 | 第209-211页 |
| 5 绿僵菌侵染寄主体表阶段全长均一化 cDNA 文库的构建与分析 | 第211-241页 |
| ·研究背景 | 第211-213页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第213-215页 |
| ·研究内容 | 第213-214页 |
| ·技术路线 | 第214-215页 |
| ·材料与方法 | 第215-228页 |
| ·供试菌株及昆虫 | 第215页 |
| ·主要仪器设备 | 第215页 |
| ·主要试剂、培养基及溶液配制 | 第215-217页 |
| ·绿僵菌培养及分生孢子悬浮液的制备 | 第217页 |
| ·东亚飞蝗后翅的处理 | 第217页 |
| ·绿僵菌分生孢子悬浮液接种东亚飞蝗后翅 | 第217页 |
| ·侵染东亚飞蝗后翅的绿僵菌 mRNA 的提取 | 第217-218页 |
| ·全长 ds cDNA 的合成 | 第218-219页 |
| ·ds cDNA 的均一化处理 | 第219-220页 |
| ·cDNA 片段的酶切和分级分离 | 第220-221页 |
| ·pDNR-LIB 酶切载体的制备 | 第221-222页 |
| ·cDNA 与载体 pDNR-LIB 连接 | 第222-223页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第223-224页 |
| ·电转化 | 第224页 |
| ·文库插入序列大小和重组率的分析 | 第224-225页 |
| ·序列测定与 ESTs 序列分析 | 第225-226页 |
| ·绿僵菌在基本培养基中的培养及总 RNA 的提取 | 第226页 |
| ·东亚飞蝗后翅总 RNA 的提取 | 第226页 |
| ·绿僵菌油剂悬浮液接种东亚飞蝗 | 第226页 |
| ·东亚飞蝗血淋巴中绿僵菌菌丝体的快速分离及总 RNA 的提取 | 第226-227页 |
| ·半定量 RT-PCR 分析不同生长条件下绿僵菌的基因表达水平 | 第227-228页 |
| ·结果和分析 | 第228-238页 |
| ·cDNA 文库质量分析 | 第228-229页 |
| ·测序结果分析 | 第229-230页 |
| ·ESTs 序列功能聚类与分析 | 第230-235页 |
| ·ESTs 与病原菌-寄主相互作用数据库的比对分析 | 第235-236页 |
| ·半定量 RT-PCR 结果分析 | 第236-238页 |
| ·讨论 | 第238-241页 |
| ·绿僵菌对寄主体表的适应机制 | 第238-239页 |
| ·表达于蝗虫后翅的 ESTs 反映自然侵染状态下绿僵菌的基因表达 | 第239-241页 |
| 6 绿僵菌 MaPLS1 全长基因的克隆与序列分析 | 第241-255页 |
| ·研究背景 | 第241-243页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第243页 |
| ·研究内容 | 第243页 |
| ·技术路线 | 第243页 |
| ·材料与方法 | 第243-248页 |
| ·供试菌株 | 第243页 |
| ·主要试剂、培养基及溶液配制 | 第243-244页 |
| ·绿僵菌 MaPLS1 基因 cDNA 序列的克隆 | 第244页 |
| ·绿僵菌基因组 DNA 的提取 | 第244-245页 |
| ·基因组文库筛选 MaPLS1 克隆 | 第245-247页 |
| ·Southern blot 杂交分析 MaPLS1 基因拷贝数 | 第247页 |
| ·序列比对和编码蛋白结构分析 | 第247-248页 |
| ·进化树的构建 | 第248页 |
| ·结果与分析 | 第248-253页 |
| ·绿僵菌 MaPLS1 基因的克隆和序列分析 | 第248-249页 |
| ·绿僵菌 MaPLS1 的基因组拷贝数分析 | 第249-250页 |
| ·绿僵菌 MaPLS1 蛋白的结构特征分析 | 第250-252页 |
| ·MaPLS1 蛋白的进化关系分析 | 第252-253页 |
| ·讨论 | 第253-255页 |
| 7 绿僵菌与稻瘟病菌之间 ESTs 的比较分析 | 第255-269页 |
| ·研究背景 | 第255页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第255-256页 |
| ·研究内容 | 第255-256页 |
| ·技术路线 | 第256页 |
| ·材料与方法 | 第256页 |
| ·稻瘟病菌 ESTs 序列的获取 | 第256页 |
| ·绿僵菌 ESTs 与稻瘟病菌 ESTs 序列的比对分析 | 第256页 |
| ·结果与分析 | 第256-267页 |
| ·绿僵菌与稻瘟病菌 ESTs 序列的 Blast 比对分析 | 第256-259页 |
| ·侵染寄主表皮相关 ESTs 序列的比较 | 第259-262页 |
| ·绿僵菌自噬相关基因的鉴定 | 第262-265页 |
| ·绿僵菌潜在毒力因子的鉴定 | 第265-267页 |
| ·讨论 | 第267-269页 |
| 8 全文小结与后续工作建议 | 第269-273页 |
| ·全文小结 | 第269-270页 |
| ·本论文创新点 | 第270页 |
| ·后续工作建议 | 第270-273页 |
| 致谢 | 第273-275页 |
| 参考文献 | 第275-313页 |
| 附录 | 第313-361页 |
| A 博士期间已发表及拟发表的论文 | 第313-314页 |
| B 附表 | 第314-361页 |
