| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 缩写表 | 第13-15页 |
| 绪论 | 第15-17页 |
| 第一部分 文献综述 | 第17-28页 |
| ·油菜遗传转化中外植体的选择 | 第17-18页 |
| ·筛选标记 | 第18页 |
| ·转化方法 | 第18-22页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化法 | 第18-20页 |
| ·DNA直接导入法 | 第20-22页 |
| ·基因枪法 | 第20页 |
| ·PEG介导法 | 第20-21页 |
| ·电激穿孔法 | 第21页 |
| ·显微注射法 | 第21页 |
| ·激光微束穿刺法 | 第21-22页 |
| ·花粉管通道法 | 第22页 |
| ·油菜转基因育种 | 第22-25页 |
| ·油菜品质改良 | 第22-23页 |
| ·油菜脂肪酸组分的改良 | 第22-23页 |
| ·油菜种子贮藏蛋白的遗传改良 | 第23页 |
| ·油菜抗性育种 | 第23-25页 |
| ·抗除草剂基因 | 第23-24页 |
| ·抗病虫害基因 | 第24页 |
| ·抗非生物逆境 | 第24-25页 |
| ·杂交不育系育种 | 第25页 |
| ·维生素E组分α生育酚的研究 | 第25-28页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第28-41页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·植物材料 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·载体与质粒 | 第28页 |
| ·仪器与设备 | 第28-29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-41页 |
| ·RNA提取及cDNA合成 | 第29-30页 |
| ·BnVET4基因PCR扩增 | 第30-31页 |
| ·PCR产物回收及测序 | 第31页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第31-32页 |
| ·表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·油菜遗传转化方法 | 第33-35页 |
| ·CTAB法提取油菜基因组DNA | 第35-36页 |
| ·Southern blot分析 | 第36-39页 |
| ·杂交探针的制备 | 第36-37页 |
| ·酶切及电泳 | 第37页 |
| ·凝胶处理 | 第37页 |
| ·印迹 | 第37-38页 |
| ·预杂交与杂交 | 第38页 |
| ·洗膜与显影 | 第38-39页 |
| ·再生抗性植株PCR、半定量PCR及实时定量PCR分析 | 第39-40页 |
| ·高效液相色谱测维生素E组分含量 | 第40-41页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第41-62页 |
| ·BnVET4基因克隆和过表达载体构建 | 第41-45页 |
| ·油菜叶片RNA提取及验证 | 第41页 |
| ·BnVET4基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·超表达载体pCAMBIA1300-BnVET4的构建与鉴定 | 第43-45页 |
| ·油菜遗传转化体系的建立 | 第45-54页 |
| ·油菜苗龄对外植体(子叶柄和下胚轴)的影响 | 第45-46页 |
| ·2,4-D和6-BA对外植体愈伤诱导的影响 | 第46-47页 |
| ·不同浓度配比的6-BA与NAA对芽再生效率的比较 | 第47-48页 |
| ·再生植株生根对激素的选择 | 第48-49页 |
| ·农杆菌浸染浓度及时间的确定 | 第49-50页 |
| ·抗生素浓度的确定 | 第50页 |
| ·转基因植株的获得 | 第50-54页 |
| ·转基因抗性再生植株的鉴定 | 第54-62页 |
| ·PCR验证转基因抗性再生植株 | 第54-55页 |
| ·半定量PCR和Real time-PCR检测BnVET4基因的表达水平 | 第55-57页 |
| ·转基因苗Southern blot分析 | 第57-58页 |
| ·维生素E组分含量测定 | 第58-62页 |
| 第四部分 讨论与结论 | 第62-67页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·关于甘蓝型油菜基因多拷贝问题 | 第62页 |
| ·油菜遗传转化体系的建立 | 第62-64页 |
| ·转化体系外植体 | 第62-63页 |
| ·预培养及共培养对转化的影响 | 第63页 |
| ·芽的再生体系的优化 | 第63-64页 |
| ·转基因植株的检测 | 第64-65页 |
| ·转基因作物生物安全 | 第65页 |
| ·结论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附录 | 第77-81页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第81-82页 |
