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螺旋藻活性肽的纯化、鉴定及降压、护肝机制研究

中文摘要第1-5页
ABSTRACT第5-12页
1 引言第12-26页
   ·螺旋藻的营养价值和生理作用第12-14页
     ·螺旋藻的营养价值第12-13页
     ·螺旋藻的生理作用第13-14页
   ·高血压的抑制机理及模型第14-16页
     ·肾素-血管紧张素系统(Renin-angiotensin system,RAS)第14-16页
     ·原发性高血压大鼠(Spontaneously hypertensive rat,SHR)模型第16页
   ·ACE抑制肽的研究进展第16-19页
     ·人工合成ACE抑制剂的发展第16-17页
     ·天然来源ACE抑制肽的研究进展第17-19页
       ·生物活性肽概述第17-18页
       ·ACE抑制肽的来源第18页
       ·ACE抑制肽的检测、纯化和鉴定第18-19页
   ·肝损害模型及调控机制第19-22页
     ·D-氨基半乳糖肝损害模型第20页
     ·对乙酰氨基酚肝损害模型第20-21页
     ·肝局部RAS系统第21-22页
   ·本课题的研究内容第22-26页
     ·主要研究内容第22-23页
     ·研究方法和技术路线第23-26页
2 螺旋藻酶解液的体外生物活性第26-40页
   ·材料与方法第26-34页
     ·主要材料与试剂第26-27页
     ·螺旋藻蛋白质的含量测定第27-28页
       ·螺旋藻蛋白质提取第27页
       ·蛋白质含量测定第27-28页
     ·螺旋藻酶解条件的优化第28-30页
       ·肽浓度的测定第29页
       ·碱性蛋白酶水解条件的确定第29页
       ·嗜热菌蛋白酶水解条件的确定第29-30页
       ·木瓜蛋白酶水解条件的确定第30页
     ·不同分子量大小酶解液的获得第30页
     ·ACE抑制活性的测定第30-32页
     ·抗氧化活性的测定第32-34页
   ·试验结果第34-38页
     ·螺旋藻蛋白质的含量测定第34页
     ·酶解条件的优化第34-38页
       ·碱性蛋白酶水解条件的确定第34-36页
       ·嗜热菌蛋白酶水解条件的确定第36-37页
       ·木瓜蛋白酶水解条件的确定第37-38页
     ·ACE抑制活性的测定结果第38页
     ·抗氧化活性的测定结果第38页
   ·讨论与分析第38-40页
3 螺旋藻源血管紧张素转化酶抑制肽的纯化和鉴定第40-68页
   ·材料与方法第40-50页
     ·主要材料与试剂第40页
     ·ACE抑制肽的纯化第40-45页
       ·碱性蛋白酶酶解液的纯化第40-43页
       ·木瓜蛋白酶水解液的纯化第43-45页
     ·ACE抑制肽的质谱分析第45-46页
     ·ACE抑制肽的氨基酸序列分析第46-47页
     ·ACE抑制肽的合成第47-49页
     ·ACE抑制肽的抑制类型分析第49页
     ·模拟消化环境稳定性分析第49-50页
   ·试验结果第50-65页
     ·ACE抑制肽的纯化第50-56页
       ·碱性蛋白酶酶解液的纯化第50-53页
       ·木瓜蛋白酶酶解液的纯化第53-56页
     ·ACE抑制肽的质谱分析第56-58页
       ·Angiotensin Ⅱ标准第56-57页
       ·碱性蛋白酶酶解肽第57页
       ·木瓜蛋白酶酶解肽第57-58页
     ·ACE抑制肽的氨基酸序列分析第58页
     ·ACE抑制肽的抑制类型分析第58-60页
       ·Ile-Gln-Pro的抑制类型第58-59页
       ·Val-Glu-Pro的抑制类型第59-60页
     ·模拟消化环境稳定性分析第60-65页
       ·Ile-Gln-Pro肽稳定性分析第60-63页
       ·Val-Glu-Pro肽稳定性分析第63-65页
   ·讨论与分析第65-68页
4 螺旋藻源血管紧张素转化酶抑制肽的体内降压作用第68-110页
   ·材料与方法第68-83页
     ·主要材料与试剂第68-69页
     ·动物试验第69-72页
       ·实验动物及饲养条件第69-70页
       ·单次口服剂量试验第70页
       ·动脉血压及心率测定第70-71页
       ·一周间口服降压效果试验第71-72页
       ·实验动物的宰杀和样本收集第72页
     ·肾脏中RAS系统主要因子的基因表达分析第72-78页
       ·肾脏总RNA的提取第72-73页
       ·第一链cDNA的合成第73-75页
       ·实时荧光定量PCR第75-78页
     ·血清中RAS系统主要因子的蛋白表达分析第78-83页
       ·血清Angiotensinogen的ELISA分析第78-80页
       ·血清ACE的ELISA分析第80-81页
       ·血清AngⅡ的ELISA分析第81-83页
     ·统计方法第83页
   ·试验结果第83-107页
     ·单次口服剂量试验第83-87页
       ·Ile-Gln-Pro的口服剂量试验第83-85页
       ·Val-Glu-Pro的口服剂量试验第85-87页
     ·一周口服降压效果试验第87-90页
       ·一周试验期间SHR大鼠的成长和饮食参数第87-88页
       ·一周试验期间SHR大鼠的WSBP变化第88-89页
       ·一周试验期间SHR大鼠的WDBP变化第89-90页
     ·肾脏中RAS系统主要成分的MRNA表达水平第90-102页
       ·看家基因GAPDH的检测结果第90-92页
       ·肾脏中Renin的mRNA表达水平第92-95页
       ·肾脏中ACE的mRNA表达水平第95-97页
       ·肾脏中AT1的mRNA表达水平第97-100页
       ·肾脏中AT2的mRNA表达水平第100-102页
     ·血清中RAS系统主要成分的蛋白表达水平第102-107页
       ·血清中Ang的蛋白表达水平第102-104页
       ·血清中ACE的蛋白表达水平第104-106页
       ·血清中AngⅡ的蛋白表达水平第106-107页
   ·讨论与分析第107-110页
5 螺旋藻及其酶解液的体内抗氧化和护肝作用第110-140页
   ·材料与方法第110-121页
     ·主要材料与试剂第110-111页
     ·膳食性螺旋藻的小鼠体内抗氧化和护肝作用第111-120页
       ·实验动物与饲料第111-112页
       ·护肝剂量试验第112-114页
       ·血清转氨酶活性的测定第114-116页
       ·体内抗氧化和护肝作用试验方案第116页
       ·肝脏中TBARS水平的检测第116-117页
       ·肝脏中GSH水平的检测第117-118页
       ·肝脏中IL-18 mRNA的Real-Time PCR分析第118-119页
       ·血清中IL-18的ELISA分析第119-120页
     ·螺旋藻酶解液的大鼠体内抗氧化和护肝作用第120-121页
       ·螺旋藻酶解液的准备第120页
       ·实验动物与饲料第120-121页
       ·血清转氨酶活性的测定第121页
       ·肝脏中TBARS水平的检测第121页
       ·肝脏中IL-18 mRNA水平的检测第121页
       ·血清中IL-18含量的检测第121页
       ·肝脏中局部RAS系统主要成分mRNA水平的检测第121页
       ·血清RAS系统主要成分含量的检测第121页
     ·统计方法第121页
   ·试验结果第121-136页
     ·膳食性螺旋藻的小鼠体内抗氧化和护肝作用第121-130页
       ·小鼠成长参数第121页
       ·螺旋藻护肝剂量试验结果第121-125页
       ·螺旋藻抗氧化试验中小鼠血清GOT和GPT的水平第125-127页
       ·小鼠肝脏中TBARS的水平第127页
       ·小鼠肝脏中GSH的水平第127-128页
       ·螺旋藻对IL-18表达水平的调控作用第128-130页
     ·螺旋藻酶解液的大鼠体内抗氧化和护肝机制第130-136页
       ·大鼠成长参数第130页
       ·大鼠血清GOT和GPT的水平第130-131页
       ·大鼠肝脏中TBARS的水平第131-132页
       ·螺旋藻酶解液对IL-18表达水平的调控作用第132-134页
       ·螺旋藻酶解液对RAS系统主要成分的表达调控作用第134-136页
   ·讨论与分析第136-140页
结论第140-142页
缩略词表第142-146页
参考文献第146-158页
个人简介第158-160页
导师简介第160-164页
获得成果目录清单第164-166页
致谢第166页

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