莱芜猪肝脏组织cDNA文库的构建和鉴定
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| ·种质资源保护的重要意义 | 第11-15页 |
| ·国外畜禽种质资源的现状和保护 | 第11-12页 |
| ·我国畜禽品种资源现状和保护 | 第12页 |
| ·莱芜猪的品种资源概况 | 第12-15页 |
| ·莱芜猪的品种地位 | 第13页 |
| ·产区自然条件 | 第13页 |
| ·品种形成历史 | 第13页 |
| ·品种特征与特性 | 第13-14页 |
| ·经济效益 | 第14-15页 |
| ·莱芜猪保种现状 | 第15页 |
| ·cDNA文库的研究进展 | 第15-22页 |
| ·cDNA文库概述 | 第15页 |
| ·构建cDNA文库的载体系统 | 第15-16页 |
| ·质粒载体系统 | 第15-16页 |
| ·噬菌体载体系统 | 第16页 |
| ·噬菌粒载体系统 | 第16页 |
| ·cDNA文库的类型 | 第16-18页 |
| ·经典cDNA文库 | 第16-17页 |
| ·全长cDNA文库 | 第17页 |
| ·标准化cDNA文库 | 第17页 |
| ·消减cDNA文库 | 第17页 |
| ·染色体区域特异性cDNA文库 | 第17-18页 |
| ·PCR介导的cDNA文库 | 第18页 |
| ·固相cDNA文库 | 第18页 |
| ·全长cDNA文库构建方法 | 第18-20页 |
| ·CAPture法 | 第18-19页 |
| ·Oligo-Capping方法 | 第19页 |
| ·SMART方法 | 第19-20页 |
| ·CAP-trapper方法 | 第20页 |
| ·Cap-jumping法 | 第20页 |
| ·cDNA文库的质量鉴定 | 第20-21页 |
| ·cDNA文库的应用 | 第21-22页 |
| ·筛选与性状相关的重要基因 | 第21页 |
| ·结合芯片技术对生物体基因的时空表达进行研究 | 第21-22页 |
| ·为表达序列标签(EST)的开发提供材料 | 第22页 |
| ·本项研究的意义 | 第22-23页 |
| 第二章 莱芜猪肝脏组织质粒cDNA文库的构建 | 第23-34页 |
| ·实验材料 | 第23页 |
| ·仪器和药品 | 第23-25页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液的配制 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-30页 |
| ·莱芜猪肝脏组织总RNA的制备 | 第25-26页 |
| ·总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·总RNA的纯度和浓度检测 | 第26页 |
| ·琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性 | 第26页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第26页 |
| ·LD-PCR扩增双链cDNA | 第26-27页 |
| ·蛋白酶K消化 | 第27页 |
| ·cDNA分级分离 | 第27-28页 |
| ·双链cDNA与载体的连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·质粒转化 | 第29页 |
| ·原始文库的构建及滴度测定 | 第29页 |
| ·文库的质量鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第29页 |
| ·cDNA插入片段的测定 | 第29-30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·总RNA纯度及产量检测 | 第30页 |
| ·总RNA完整性检测 | 第30-31页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第31页 |
| ·原始文库的滴度及重组率的测定 | 第31页 |
| ·文库插入片段大小的分析 | 第31-32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| ·RNA的提取 | 第32页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第32-33页 |
| ·cDNA文库的质量评价 | 第33-34页 |
| 第三章 莱芜猪肝脏组织噬菌体cDNA文库的构建 | 第34-49页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·仪器和药品 | 第34-35页 |
| ·实验仪器 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要溶液的配制 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·莱芜猪肝脏组织总RNA的制备 | 第35页 |
| ·cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| ·LD-PCR扩增双链cDNA | 第36页 |
| ·蛋白酶K消化 | 第36页 |
| ·SfiI酶切消化 | 第36页 |
| ·cDNA的分级分离 | 第36-37页 |
| ·双链cDNA与载体λTriplEx2的连接 | 第37页 |
| ·λ噬菌体的体外包装 | 第37-38页 |
| ·细菌培养平板的制备 | 第38页 |
| ·原始文库的滴度测定 | 第38页 |
| ·原始文库的扩增 | 第38-39页 |
| ·扩增文库的滴度测定 | 第39页 |
| ·λTriplEx2向pTriplEx2的转化 | 第39页 |
| ·文库的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·数据处理与分析 | 第40页 |
| ·结果与分析 | 第40-46页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第40-41页 |
| ·双链cDNA的酶切及分级分离 | 第41页 |
| ·原始cDNA文库的质量鉴定 | 第41页 |
| ·扩增文库的质量鉴定及插入片段大小的检测结果 | 第41页 |
| ·序列分析 | 第41-46页 |
| ·同源性比对分析 | 第41-42页 |
| ·ORF分析 | 第42-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·文库质量评价 | 第46页 |
| ·EST序列及功能分析 | 第46页 |
| ·建库过程中应注意的事项 | 第46-47页 |
| ·载体的选择 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 附录 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第58页 |
