| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-18页 |
| ·酵母双杂交技术原理 | 第12-13页 |
| ·酵母双杂交技术的改进和发展 | 第13-15页 |
| ·哺乳动物细胞双杂交系统 | 第14页 |
| ·Sos 恢复系统 | 第14页 |
| ·逆向双杂交系统 | 第14-15页 |
| ·酵母双杂交系统在水产动物病毒研究中的应用 | 第15-16页 |
| ·酵母双杂交技术应用前景及其展望 | 第16页 |
| ·GCRV 基因组及 VP7 蛋白研究进展 | 第16-18页 |
| ·研究的目的和意义 | 第18页 |
| 2 诱饵菌株的构建 | 第18-31页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·病毒、细胞和酵母菌株 | 第18页 |
| ·质粒载体和受体菌株 | 第18-20页 |
| ·主要试剂、工具酶及试剂盒 | 第20页 |
| ·主要溶液和试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-28页 |
| ·vp7 ORF 的克隆 | 第21-23页 |
| ·诱饵质粒的构建与扩增 | 第23-27页 |
| ·诱饵质粒的转化及阳性克隆的鉴定 | 第27-28页 |
| ·诱饵质粒自激活性及毒性检测 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-30页 |
| ·vp7 ORF 克隆结果与分析 | 第28-29页 |
| ·重组诱饵质粒双酶切及菌落 PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·酵母菌株阳性克隆的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组菌报告基因表达检测结果 | 第30页 |
| ·诱饵转化株在选择性培养基中的生长情况 | 第30页 |
| ·融合蛋白毒性检测结果 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 3 草鱼 CIK 细胞系全长 cDNA 文库的构建 | 第31-43页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·菌株和细胞 | 第31-32页 |
| ·质粒载体 | 第32-33页 |
| ·主要试剂、工具酶及试剂盒 | 第33页 |
| ·培养基及主要溶液的配置 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-39页 |
| ·草鱼 CIK 细胞系总 RNA 的提取与 mRNA 的纯化 | 第34-35页 |
| ·长距离 PCR 合成 cDNA 第一链 | 第35页 |
| ·cDNA 第二链的合成及双链 cDNA 的纯化 | 第35-37页 |
| ·dsDNA 和 pGADT7-Rec 共转化酵母菌株 Y18726 | 第37-38页 |
| ·文库克隆子的收获 | 第38页 |
| ·文库鉴定 | 第38-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·草鱼 CIK 细胞总 RNA 鉴定及 mRNA 纯化分析 | 第39页 |
| ·cDNA 第一链及双链 cDNA 纯化结果分析 | 第39-40页 |
| ·文库的构建以及鉴定 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 4 菌株的融合和阳性克隆的初步验证及鉴定 | 第43-60页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·酵母菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要试剂、酶及试剂盒 | 第43页 |
| ·培养基及其他试剂的配置 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·文库菌株与诱饵菌株的融合与选择性培养 | 第44-45页 |
| ·文库滴度的确定及诱饵菌株复苏 | 第44页 |
| ·文库菌株 Y187 与诱饵菌株 Y2HGold 的融合 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的鉴定及初步验证 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| ·测序阳性克隆的初步验证 | 第46页 |
| ·结果与分析 | 第46-57页 |
| ·菌株融合结果 | 第46-48页 |
| ·阳性克隆结果鉴定分析结果 | 第48-51页 |
| ·cDNA 序列分析 | 第51-57页 |
| ·鉴定的阳性克隆的初步验证 | 第57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 作者简历 | 第68-69页 |
| 导师简介 | 第69页 |
