| 缩略语 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-17页 |
| ·课题背景 | 第11页 |
| ·国内外研究现状 | 第11-16页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第16页 |
| ·技术路线 | 第16-17页 |
| 第2章 材料和方法 | 第17-31页 |
| ·实验材料 | 第17-21页 |
| ·菌株 | 第17页 |
| ·细胞系 | 第17页 |
| ·载体质粒 | 第17-18页 |
| ·各种酶类、试剂盒和特殊进口试剂 | 第18页 |
| ·常用缓冲液及其他溶液 | 第18-19页 |
| ·培养基 | 第19-20页 |
| ·引物合成及DNA序列测定 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·主要软件 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-30页 |
| ·p18 基因截短体的设计 | 第21-23页 |
| ·载体构建 | 第23-25页 |
| ·转化 | 第25页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第25-26页 |
| ·质粒提取 | 第26页 |
| ·质粒稳定性测试 | 第26页 |
| ·质粒转化表达菌株 | 第26页 |
| ·预表达融合蛋白 | 第26-27页 |
| ·大量表达靶蛋白 | 第27页 |
| ·纯化融合蛋白 | 第27-28页 |
| ·酵母细胞转化 | 第28-29页 |
| ·酿酒酵母INVSc1 的蛋白诱导表达 | 第29页 |
| ·酵母细胞裂解 | 第29页 |
| ·Western blot检测蛋白表达 | 第29-30页 |
| ·GST pull down检测蛋白相互作用 | 第30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第3章 p18 基因截短体在大肠杆菌中的表达 | 第31-37页 |
| ·p18 截短体的原核表达重组体的构建 | 第31-32页 |
| ·PCR扩增p18 基因截短体 | 第31-32页 |
| ·重组体插入片段的验证 | 第32页 |
| ·p18 截短体在原核中的表达及纯化 | 第32-36页 |
| ·p18 基因截短体在大肠杆菌Rosetta（DE3）中的表达 | 第32-35页 |
| ·融合蛋白P18-280-GST的纯化 | 第35-36页 |
| ·融合蛋白P18-280-GST的蛋白相互作用检测 | 第36页 |
| ·本章小结 | 第36-37页 |
| 第4章 p18 基因在酵母中的表达 | 第37-41页 |
| ·p18 截短体的真核表达重组体的构建 | 第37-39页 |
| ·PCR扩增p18 基因 | 第37页 |
| ·PCR扩增gst序列 | 第37-38页 |
| ·重组体插入片段的验证 | 第38-39页 |
| ·p18 基因在真核中的表达 | 第39-40页 |
| ·P18-GST融合蛋白在酿酒酵母INVSc1 中的表达、纯化 | 第39页 |
| ·融合蛋白P18-GST的Western Blot 验证 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第5章 蛋白质体外表达条件优化及分析 | 第41-45页 |
| ·大肠杆菌表达条件优化与分析 | 第41-43页 |
| ·外源基因自身因素的影响 | 第41页 |
| ·翻译效率的优化 | 第41-42页 |
| ·密码子的使用 | 第42页 |
| ·培养基的选择 | 第42页 |
| ·可溶性外源蛋白的表达 | 第42-43页 |
| ·酵母表达条件优化与分析 | 第43-44页 |
| ·酿酒酵母诱导培养基中碳源的选择 | 第43页 |
| ·诱导时间的选择 | 第43-44页 |
| ·本章小结 | 第44-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录 | 第50-55页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
