| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-14页 |
| 1 前言 | 第14-33页 |
| 1．1 研究的目的和意义 | 第14页 |
| 1．2 文献综述 | 第14-33页 |
| 1．2．1 植物抗真菌病基因工程的研究进展 | 第14-22页 |
| 1．2．1．1 植物抗真菌病基因工程的主要策略 | 第14-17页 |
| 1．2．1．2 几丁质酶及其在抗真菌病基因工程中的研究进展 | 第17-19页 |
| 1．2．1．3 葡聚糖酶及其在抗真菌病基因工程中的研究进展 | 第19-20页 |
| 1．2．1．4 核糖体失活蛋白及其在抗真菌病基因王程中的研究进展 | 第20-22页 |
| 1．2．1．5 几丁质酶、葡聚糖酶和核糖体失活蛋白的协同抑菌作用 | 第22页 |
| 1．2．2 大豆遗传转化研究进展 | 第22-31页 |
| 1．2．2．1 用于大豆遗传转化的基因种类 | 第22-24页 |
| 1．2．2．2 遗传转化方法 | 第24-28页 |
| 1．2．2．3 再生系统 | 第28-31页 |
| 1．2．3 大豆抗真菌病基因遗传转化中存在的问题 | 第31-33页 |
| 2 材料与方法 | 第33-45页 |
| 2．1 植物表达载体构建 | 第33-35页 |
| 2．1．1 试验材料 | 第33页 |
| 2．1．1．1 菌株与质粒 | 第33页 |
| 2．1．1 ．2工酶类与试剂 | 第33页 |
| 2．1．2 试验方法 | 第33-35页 |
| 2．1．2．1 质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2．1．2．2 质粒的限制酶消化反应 | 第34页 |
| 2．1．2．3 线状质粒的去磷酸化 | 第34页 |
| 2．1．2．4 酶切产物的回收 | 第34页 |
| 2．1．2．5 回收片段的连接 | 第34-35页 |
| 2．1．2．6 大肠杆菌感受态的制备 | 第35页 |
| 2．1．2．7 连接产物向大肠杆菌的转化 | 第35页 |
| 2．2 大豆再生体系的建立 | 第35-38页 |
| 2．2．1 子叶节器官发生途径 | 第35-36页 |
| 2．2．1．1 子叶节的获得 | 第35页 |
| 2．2．1．2 丛生芽的诱导 | 第35-36页 |
| 2．2．1．3 丛生芽的伸长和生根培养 | 第36页 |
| 2．2．2 幼胚子叶体细胞胚发生途径 | 第36-38页 |
| 2．2．2．1 体细胞胚的诱导 | 第36-37页 |
| 2．2．2．1．1 诱导方法 | 第36页 |
| 2．2．2．1．2 体细胞胚诱导主要影响因素的研究 | 第36-37页 |
| 2．2．2．2 体细胞胚的增殖 | 第37页 |
| 2．2．2．3 体细胞胚的成熟 | 第37页 |
| 2．2．2．4 体细胞胚的萌发和植株再生 | 第37-38页 |
| 2．3 农杆菌介导的子叶节遗传转化 | 第38-40页 |
| 2．3．1 试验材料 | 第38页 |
| 2．3．1．1 植物材料 | 第38页 |
| 2．3．1．2 菌株与质粒 | 第38页 |
| 2．3．2 试验方法 | 第38-40页 |
| 2．3．2．1 卡那霉素筛选浓度的确定 | 第38-39页 |
| 2．3．2．1．1 丛生芽分化阶段 | 第38页 |
| 2．3．2．1．2 丛生芽生根阶段 | 第38-39页 |
| 2．3．2．2 菌液的制备 | 第39页 |
| 2．3．2．2．1 根癌农杆菌感受态的制备 | 第39页 |
| 2．3．2．2．2 三亲交配法转化根癌农杆菌 | 第39页 |
| 2．3．2．2．3 菌种活化 | 第39页 |
| 2．3．2．3 转化程序 | 第39-40页 |
| 2．3．2．4 影响遗传转化效率的因素探讨 | 第40页 |
| 2．3．2．4．1 基因型 | 第40页 |
| 2．3．2．4．2 影响遗传转化主要因子的正交试验 | 第40页 |
| 2．4 基因枪法对幼胚子叶的遗传转化 | 第40-41页 |
| 2．4．1 试验材料 | 第40-41页 |
| 2．4．1．1 植物材料 | 第40页 |
| 2．4．1．2 菌株与质粒 | 第40-41页 |
| 2．4．2 试验方法 | 第41页 |
| 2．4．2．1 卡那霉素筛选浓度的确定 | 第41页 |
| 2．4．2．2 基因枪转化程序 | 第41页 |
| 2．5 转基因植株的检测 | 第41-44页 |
| 2．5．1 PCR扩增 | 第41-44页 |
| 2．5．1．1 试验材料 | 第41-42页 |
| 2．5．1．2 试验方法 | 第42-44页 |
| 2．5．1．2．1 植株总DNA提取 | 第42-43页 |
| 2．5．1．2．2 PCR反应体系 | 第43页 |
| 2．5．1．2．3 PCR反应条件 | 第43-44页 |
| 2．5．2 Southern杂交 | 第44页 |
| 2．5．2．1 DNA探针标记 | 第44页 |
| 2．5．2．2 Southern杂交 | 第44页 |
| 2．6 统计分析方法 | 第44-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-69页 |
| 3．1 几丁质酶基因和核糖体失活蛋白基因双价植物表达载体的构建 | 第45-53页 |
| 3．1．1 中间克隆载体pUR01的构建 | 第45页 |
| 3．1．2 中间表达载体pARIP的构建 | 第45页 |
| 3．1．3 植物表达载体pBIRIP的构建 | 第45-46页 |
| 3．1．4 植物表达载体pBchE的构建 | 第46页 |
| 3．1．5 双价植物表达载体pBRC的构建 | 第46-53页 |
| 3．2 大豆再生体系的建立 | 第53-60页 |
| 3．2．1 大豆子叶节器官发生途径 | 第53-56页 |
| 3．2．1．1 子叶节丛生芽分化的影响因素 | 第53-54页 |
| 3．2．1．1．1 基因型 | 第53-54页 |
| 3．2．1．1．2 BA浓度 | 第54页 |
| 3．2．1．2 生根培养基的确定 | 第54-56页 |
| 3．2．2 大豆幼胚子叶体细胞胚发生途径 | 第56-60页 |
| 3．2．2．1 幼胚子叶体细胞胚诱导的主要影响因素 | 第56-59页 |
| 3．2．2．1．1 氮源、生长素和蔗糖 | 第56-58页 |
| 3．2．2．1．2 培养基pH值和低温预处理 | 第58页 |
| 3．2．2．1．3 基因型和不同低温预处理时间 | 第58-59页 |
| 3．2．2．2 活性炭和蔗糖浓度对体细胞胚成熟的影响 | 第59-60页 |
| 3．2．2．3 干燥处理对体细胞胚萌发的影响 | 第60页 |
| 3．3 农杆菌介导的子叶节遗传转化 | 第60-64页 |
| 3．3．1 卡那霉素筛选浓度的确定 | 第60-61页 |
| 3．3．1．1 丛生芽分化阶段卡那霉素筛选浓度的确定 | 第60页 |
| 3．3．1．2 丛生芽生根阶段卡那霉素筛选浓度的确定 | 第60-61页 |
| 3．3．2 遗传转化主要影响因素的探讨 | 第61-63页 |
| 3．3．2．1 基因型 | 第61-63页 |
| 3．3．2．2 影响遗传转化几个主要因子的正交试验 | 第63页 |
| 3．3．3 转化体的筛选和转基因植株的再生 | 第63-64页 |
| 3．4 基因枪法对幼胚子叶的遗传转化 | 第64页 |
| 3．4．1 卡那霉素筛选浓度的确定 | 第64页 |
| 3．4．2 转化体的筛选和转基因植株的再生 | 第64页 |
| 3．5 转基因植株的检测 | 第64-69页 |
| 3．5．1 农杆菌转化目的基因的检测 | 第64-65页 |
| 3．5．1．1 PCR扩增 | 第64页 |
| 3．5．1．2 Southern杂交 | 第64-65页 |
| 3．5．2 基因枪转化目的基因的检测 | 第65-69页 |
| 3．5．2．1 PCR扩增 | 第65页 |
| 3．5．2．2 Southern杂交 | 第65-69页 |
| 4 讨论 | 第69-77页 |
| 4．1 多基因遗传转化策略防治植物真菌病害 | 第69页 |
| 4．2 建立高效的再生体系是遗传转化的基础 | 第69-73页 |
| 4．3 大豆高效遗传转化体系的影响因素 | 第73-76页 |
| 4．4 两种遗传转化方法的比较 | 第76-77页 |
| 5 结论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 图版 | 第91-95页 |
| 图版说明 | 第95页 |
