| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-26页 |
| 引言 | 第12页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒概述 | 第12-20页 |
| ·历史回顾 | 第12-13页 |
| ·病原体 | 第13-16页 |
| ·BVDV 引起粘膜病的致病机理研究 | 第16-19页 |
| ·流行病学 | 第19-20页 |
| ·牛病毒性腹泻一粘膜病在我国的防制状况 | 第20页 |
| ·诊断方法研究进展 | 第20-24页 |
| ·血清学诊断方法 | 第20-22页 |
| ·分子生物学实验技术 | 第22-24页 |
| ·牛病毒性腹泻新型疫苗研究 | 第24-25页 |
| ·病毒载体疫苗 | 第24页 |
| ·基因工程亚单位疫苗 | 第24页 |
| ·DNA 疫苗 | 第24-25页 |
| ·研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 牛病毒性腹泻病毒E2 蛋白的截短表达与鉴定 | 第26-39页 |
| ·材料与方法 | 第26-29页 |
| ·克隆质粒、菌株及病毒、细胞与血清 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要的仪器设备 | 第26-27页 |
| ·MDBK 细胞的培养与病毒基因组RNA 的提取 | 第27页 |
| ·E2 蛋白抗原性、亲水性和表面展示概率分析 | 第27页 |
| ·引物设计与合成 | 第27页 |
| ·E2 基因的RT-PCR 扩增与表达载体的构建 | 第27-28页 |
| ·pET30a-E2 重组蛋白的表达及优化 | 第28页 |
| ·重组蛋白表达效率的测定 | 第28页 |
| ·表达形式的鉴定 | 第28-29页 |
| ·表达产物的纯化 | 第29页 |
| ·免疫印迹检测 | 第29页 |
| ·间接ELISA 检测 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-35页 |
| ·生物学软件分析结果 | 第29-30页 |
| ·PCR 及表达载体的鉴定 | 第30页 |
| ·诱导条件及其优化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白表达效率的测定结果 | 第31-32页 |
| ·表达蛋白在细菌中的存在形式 | 第32-33页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第33-34页 |
| ·免疫印迹分析 | 第34-35页 |
| ·不同血清样品的间接ELISA 检测结果 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-39页 |
| ·BVDV E2 蛋白特性 | 第35-36页 |
| ·表达系统的选择 | 第36页 |
| ·包涵体纯化策略 | 第36-37页 |
| ·应用前景 | 第37-39页 |
| 第三章 牛病毒性腹泻病毒巢式RT-PCR | 第39-50页 |
| ·材料与方法 | 第39-42页 |
| ·病毒与细胞 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·引物设计 | 第39-40页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第40页 |
| ·反转录合成cDNA | 第40页 |
| ·RT-PCR 反应条件的优化 | 第40-41页 |
| ·最适模板浓度的确定 | 第40页 |
| ·最适引物使用量的确定 | 第40页 |
| ·最适退火温度的确定 | 第40-41页 |
| ·PCR 扩增体系与循环参数 | 第41页 |
| ·扩增产物的检测及鉴定 | 第41页 |
| ·PCR 交叉反应试验 | 第41页 |
| ·PCR 敏感性试验 | 第41-42页 |
| ·PCR 重复性试验 | 第42页 |
| ·待测样品RNA 的制备与检测 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·病毒RNA 的提取 | 第42-43页 |
| ·扩增产物的检测及鉴定 | 第43-45页 |
| ·扩增产物的检测 | 第43页 |
| ·扩增产物的酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·扩增产物的测序鉴定 | 第44-45页 |
| ·交叉反应试验 | 第45页 |
| ·敏感性试验 | 第45-46页 |
| ·重复性试验 | 第46页 |
| ·试验样品的检测 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-50页 |
| ·PCR 检测基因的选择与引物的设计 | 第47页 |
| ·RT-PCR 反应的特异性 | 第47-48页 |
| ·RT-PCR 反应的敏感性 | 第48页 |
| ·影响 RT-PCR 试验成败的因素 | 第48页 |
| ·RT-PCR 诊断方法在牛感染 BVDV 病毒检测中的应用 | 第48-50页 |
| 第四章 全文结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |