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利用cDNA-AFLP分析甘蔗与黑穗病菌互作后的基因差异表达

摘要第1-10页
Abstract第10-11页
1 前言第11-24页
   ·甘蔗抗黑穗病研究现状及其意义第11-14页
     ·甘蔗黑穗病症状及其病原研究第11-12页
     ·甘蔗对黑穗病抗性机制的研究第12-13页
     ·甘蔗抗黑穗病性的遗传研究第13页
     ·甘蔗抗黑穗病育种研究第13-14页
   ·植物与病原菌互作研究第14-20页
     ·生理生化水平研究第14页
     ·基因差异表达研究第14-20页
       ·消减杂交第15页
       ·mRNA差异显示第15-16页
       ·cDNA代表性差异分析第16-17页
       ·基因表达系列分析第17-18页
       ·抑制消减杂交第18-19页
       ·cDNA微阵列第19-20页
       ·差异削减展示第20页
   ·cDNA-AFLP技术及其在植物基因差异表达分析上的应用第20-23页
     ·cDNA-AFLP技术的原理和方法第20-21页
     ·cDNA-AFLP技术的优点和局限性第21页
     ·cDNA-AFLP技术的操作要点第21-22页
     ·cDNA-AFLP技术在基因差异表达研究上的应用第22-23页
   ·本研究的意义第23-24页
2 材料与方法第24-33页
   ·试验材料第24页
   ·仪器设备及试剂第24页
     ·仪器设备第24页
     ·试剂第24页
   ·试验方法第24-33页
     ·试验用甘蔗材料的处理方法第24-25页
     ·RNA的提取第25页
       ·DEPC处理第25页
       ·RNA提取第25页
     ·全长cDNA第一链和第二链的合成第25-27页
       ·第一链cDNA的合成第25-26页
       ·LD-PCR扩增cDNA第二链第26-27页
     ·限制性酶切及接头连接第27页
     ·预扩增第27-28页
     ·选择性PCR扩增第28页
     ·聚丙烯酰胺凝胶电泳分析第28-29页
     ·凝胶银染第29页
     ·差异片段的回收和重扩增第29-30页
     ·差异片段的克隆与序列测定第30页
       ·感受态细胞的制备第30页
       ·载体连接第30页
       ·感受态细胞转化第30页
       ·cDNA测序第30页
     ·半定量RT-PCR方法验证差异表达基因的真实性第30-32页
     ·差异表达基因的blastx分析第32页
     ·半定量RT-PCR方法分析差异表达基因的表达谱第32-33页
3 结果与分析第33-42页
   ·RNA提取结果第33页
   ·cDNA-AFLP分析结果第33-35页
   ·差异片段的二次扩增结果第35页
   ·差异表达基因的RT-PCR验证第35-36页
   ·差异表达基因的同源性分析与功能分类第36-39页
   ·差异表达基因的表达谱分析第39-42页
4 讨论第42-51页
   ·研究材料和接种方法的选择第42页
   ·关于甘蔗与黑穗病菌互作研究中cDNA-AFLP和银染技术的应用第42-43页
   ·黑穗病菌胁迫下甘蔗差异表达基因的功能及其作用模式第43-48页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗细胞拯救与防御系统的影响第44页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗新陈代谢和能量代谢的影响第44-45页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗细胞内运输活动的影响第45页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗体内信号转导过程的影响第45-46页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗体内核酸代谢的影响第46-47页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗体内转录过程的影响第47页
     ·黑穗病菌胁迫对甘蔗体内蛋白质合成与调节的影响第47-48页
     ·未知功能蛋白第48页
   ·关于差异表达基因表达谱分析中RT-PCR技术的应用第48-49页
   ·关于本研究的局限性和后续研究设想第49-51页
5 结论第51-52页
参考文献第52-60页
附录一第60-61页
附录二第61-66页
硕士期间发表及投稿论文第66-67页
导师简历第67-68页
致谢第68页

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