| 摘要 | 第1-15页 |
| ABSTRACT | 第15-17页 |
| 前言 | 第17-34页 |
| 1. 我国对虾的养殖现状 | 第17页 |
| 2. 对虾白斑综合症病毒（white spot syndrome virus，WSSV） | 第17-18页 |
| 3. 对虾的免疫系统 | 第18-19页 |
| ·细胞免疫 | 第18-19页 |
| ·体液免疫 | 第19页 |
| 4. 酵母双杂交系统的原理、发展及应用 | 第19-24页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统的发展和衍生 | 第20-23页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第23-24页 |
| ·酵母双杂交系统的优点 | 第24页 |
| ·酵母双杂交的局限 | 第24页 |
| 5. 丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK） | 第24-31页 |
| ·胞外信号调节激酶（extracellular signal regulated kinase,ERK） | 第26-28页 |
| ·p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK） | 第28-29页 |
| ·JNK/SPAK 信号转导通路 | 第29-30页 |
| ·ERK5 | 第30页 |
| ·其他 | 第30-31页 |
| 6. Centaurin-alpha1 | 第31-33页 |
| ·Centaurin 蛋白家族的结构和功能 | 第31-32页 |
| ·Centaurin-alpha1（Centaurin-α1） | 第32-33页 |
| 7. 本论文研究的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第一部分 日本对虾酵母双杂交文库的构建和初步筛选 | 第34-54页 |
| 1. 前言 | 第34页 |
| 2. 材料和方法 | 第34-46页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·溶液和培养基的配置 | 第35-37页 |
| ·方法 | 第37-46页 |
| ·血细胞的收集与保存 | 第37页 |
| ·从对虾的肝胰腺及血细胞中直接抽提mRNA | 第37-38页 |
| ·SMART cDNA 的合成 | 第38-40页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第40页 |
| ·酵母双杂交文库的构建 | 第40-42页 |
| ·酵母双杂交文库有效性鉴定 | 第42页 |
| ·酵母菌落PCR | 第42页 |
| ·诱饵蛋白 DNA-BD/bait 重组质粒的构建 | 第42-43页 |
| ·检测 DNA-BD/bait 蛋白的毒性 | 第43页 |
| ·检测 DNA-BD/bait 蛋白的自激活活性 | 第43页 |
| ·酵母细胞的少量转化 | 第43页 |
| ·His3 和 Ade2 报告基因的表达检测 | 第43-44页 |
| ·LacZ 报告基因的表达检测 | 第44页 |
| ·酵母蛋白样品的制备 | 第44页 |
| ·酵母双杂交文库的筛选 | 第44-46页 |
| 3. 结果 | 第46-52页 |
| ·日本对虾血细胞及肝胰腺 SMART cDNA 的合成 | 第46-47页 |
| ·酵母双杂交文库的构建 | 第47页 |
| ·诱饵蛋白pGBKT7-TCTP融合质粒的构建和表达检测 | 第47-48页 |
| ·利用酵母双杂交文库筛选TCTP相互作用蛋白 | 第48-49页 |
| ·部分阳性克隆子基因在昆虫细胞中的表达 | 第49-52页 |
| 4. 小结与讨论 | 第52-53页 |
| 5. 展望 | 第53-54页 |
| 第二部分 日本对虾丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase, MAPK）ERK1/2与WSSV病毒感染关系的初步研究 | 第54-80页 |
| 1. 前言 | 第54页 |
| 2. 材料和方法 | 第54-64页 |
| ·材料 | 第54-56页 |
| ·溶液和培养基的配置 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-64页 |
| ·日本对虾血细胞或肝胰腺总 RNA 的抽提 | 第56页 |
| ·RNA 样品中残余基因组 DNA 的去除 | 第56-57页 |
| ·总 RNA 的逆转录 | 第57页 |
| ·3’cDNA 末端快速扩增（3’RACE） | 第57-59页 |
| ·5’cDNA 末端快速扩增（5’RACE） | 第59-63页 |
| ·日本对虾 WSSV 的 PCR 检测 | 第63-64页 |
| ·日本对虾原代血细胞的培养和病毒的人工感染 | 第64页 |
| ·Western blot 中膜的再生 | 第64页 |
| 3. 结果 | 第64-78页 |
| ·日本对虾 ERK1/2 基因全长序列的克隆与分析 | 第64-72页 |
| ·日本对虾肝胰腺总 RNA 的抽提 | 第65页 |
| ·日本对虾 ERK1/2 基因中间部分序列的扩增 | 第65页 |
| ·日本对虾ERK1/2基因N端序列的扩增 | 第65-66页 |
| ·日本对虾 ERK1/2 基因的结构 | 第66-69页 |
| ·日本对虾 ERK1/2 与 WSSV 刺激的关系 | 第69-72页 |
| ·日本对虾ERK1/2 蛋白的Western blot 检测 | 第69-71页 |
| ·日本对虾 ERK1/2 蛋白与 WSSV 感染的关系 | 第71-72页 |
| ·日本对虾p38 基因全长序列的克隆与分析 | 第72-78页 |
| ·日本对虾p38 基因部分序列的获得 | 第72-73页 |
| ·日本对虾p38 基因 C 端序列的扩增 | 第73页 |
| ·日本对虾p38 基因 N 端序列的扩增 | 第73-74页 |
| ·日本对虾p38 基因的结构 | 第74-78页 |
| 4. 小结与讨论 | 第78-79页 |
| 5. 展望 | 第79-80页 |
| 第三部分 日本对虾免疫相关因子 centaurin-α1 的克隆及与 WSSV病毒感染关系的初步研究 | 第80-92页 |
| 1. 前言 | 第80页 |
| 2. 材料和方法 | 第80-82页 |
| ·材料 | 第80-81页 |
| ·方法 | 第81-82页 |
| ·正常日本对虾病毒的人工感染 | 第81页 |
| ·Real time PCR | 第81-82页 |
| ·免疫荧光 | 第82页 |
| 3. 结果 | 第82-88页 |
| ·日本对虾centaurin-α1 基因与WSSV 病毒感染的关系 | 第82-85页 |
| ·抗病虾与普通虾之间centaurin-α1 基因表达量的差异 | 第82-83页 |
| ·WSSV 病毒感染过程中日本对虾centaurin-α1 基因表达量的变化 | 第83-85页 |
| ·日本对虾centaurin-α1 基因全长序列的克隆与分析 | 第85-87页 |
| ·centaurin-α1 基因全长序列的克隆 | 第85页 |
| ·centaurin-α1 基因全长序列及结构特征 | 第85-87页 |
| ·日本对虾centaurin-α1 的分布 | 第87-88页 |
| ·日本对虾centaurin-α1 的组织分布 | 第87页 |
| ·日本对虾centaurin-α1 的细胞定位 | 第87-88页 |
| 4. 小结与讨论 | 第88-89页 |
| 5. 展望 | 第89-91页 |
| 总结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-101页 |
| 附录 1 本论文所用主要实验仪器 | 第101-103页 |
| 附录 2 常用材料和试剂 | 第103-104页 |
| 附录 3 常规实验方法 | 第104-108页 |
| 附录 4 常用溶液和培养基的配制 | 第108-111页 |
| 附录 5 相关载体信息 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
