| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-22页 |
| 前言 | 第22-26页 |
| 第一章 EGF-Linker-TCSKDEL融合蛋白的研究 | 第26-32页 |
| ·材料与方法 | 第26-28页 |
| ·质粒、菌株及试剂 | 第26页 |
| ·EGF-Linker-TCSKDEL基因的扩增 | 第26-27页 |
| ·EGF-linker-TCSKDEL基因的克隆及表达载体的构建 | 第27页 |
| ·阳性菌落的鉴定 | 第27页 |
| ·EGF-linker-TCSKDEL基因序列的测定 | 第27页 |
| ·EGF-linker-TCSKDEL的表达及免疫印迹分析 | 第27页 |
| ·EGF-Linker-TCSKDEL的纯化 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·EGF-linker-TCSKDEL的PCR扩增 | 第28页 |
| ·EGF-linker-TCSKDEL表达载体的构建 | 第28页 |
| ·Pet28a/EGF-Linker-TCSKDEL基因序列的测定 | 第28-29页 |
| ·EGF-Linker-TCSKDEL基因的表达及纯化和免疫印迹分析 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 EGF-Linker-TCSKDEL对细胞的体外杀伤作用研究 | 第32-38页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第32页 |
| ·细胞株 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33页 |
| ·MTT法检测 | 第33页 |
| ·BrdU参入检测 | 第33页 |
| ·结果 | 第33-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 流式细胞仪检测融合蛋白对细胞的凋亡和周期的影响 | 第38-44页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第四章 EGF-Linker-TCSKDEL对体内肿瘤生长的抑制作用研究 | 第44-64页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·样品与试剂 | 第44-45页 |
| ·实验动物 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-47页 |
| ·小鼠急性毒性实验 | 第45页 |
| ·细胞株及培养 | 第45页 |
| ·实体瘤动物模型的建立及实验分组和给药 | 第45-46页 |
| ·EGF-Linker-TCSKDEL对瘤内微血管密度的影响 | 第46页 |
| ·融合蛋白对荷瘤小鼠外周血象指标的影响 | 第46页 |
| ·生化指标测定 | 第46-47页 |
| ·脏器指数测定 | 第47页 |
| ·组织形态学检查 | 第47页 |
| ·统计学处理 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-61页 |
| ·融合蛋白对小鼠的急性毒性 | 第47-50页 |
| ·融合蛋白对肺癌A549移植实体瘤的生长抑制作用 | 第50-51页 |
| ·融合蛋白对肿瘤组织的影响 | 第51-53页 |
| ·融合蛋白对瘤内微血管的影响 | 第53-54页 |
| ·融合蛋白对荷瘤小鼠外周血象指标的影响 | 第54-55页 |
| ·融合蛋白对裸鼠脏器的影响 | 第55-61页 |
| ·讨论 | 第61-64页 |
| 第五章 EGF-Linker-TCSKDEL的靶向性研究 | 第64-71页 |
| ·材料 | 第64-65页 |
| ·细胞株 | 第64页 |
| ·主要仪器 | 第64-65页 |
| ·主要试剂 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-67页 |
| ·细胞培养 | 第65页 |
| ·流式细胞术检测细胞EGF受体的表达 | 第65-66页 |
| ·ELISA法检测EGFR表达 | 第66页 |
| ·Western blotting检测EGFR的表达 | 第66-67页 |
| ·结果 | 第67-69页 |
| ·流式细胞术检测细胞EGF受体的表达 | 第67-68页 |
| ·ELISA法检测EGFR表达 | 第68页 |
| ·Western blotting检测EGFR的表达 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 第六章 EGF-Linker-TCSKDEL对新生血管形成的影响 | 第71-78页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·细胞株 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·主要试剂 | 第71-72页 |
| ·方法 | 第72页 |
| ·对体外血管内皮细胞生长的影响 | 第72页 |
| ·对鸡胚尿囊膜新生血管形成的影响 | 第72页 |
| ·结果 | 第72-76页 |
| ·融合蛋白对体外HUVEC及ECV-304细胞生长的影响 | 第72-73页 |
| ·融合蛋白对鸡胚尿囊膜新生血管形成的影响 | 第73-76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| 第七章 EGF-Linker-TCSKDEL对信号通路的影响 | 第78-89页 |
| ·材料与仪器 | 第78-80页 |
| ·细胞系 | 第78页 |
| ·试剂 | 第78-79页 |
| ·主要仪器 | 第79-80页 |
| ·方法 | 第80-83页 |
| ·细胞培养 | 第80页 |
| ·裂解细胞 | 第80页 |
| ·蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第80-81页 |
| ·考马斯亮蓝对胶染色 | 第81页 |
| ·蛋白质从凝胶转移至固相支持体 | 第81-83页 |
| ·结果: | 第83-85页 |
| ·蛋白定量结果 | 第83页 |
| ·Western Blotting检测融合蛋白对ERK1/2信号通路的影响 | 第83-84页 |
| ·融合蛋白对AKT信号通路的影响 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-89页 |
| ·融合蛋白对ERK1/2信号通路的影响 | 第85-87页 |
| ·融合蛋白对AKT信号通路的影响 | 第87-89页 |
| 全文小结 | 第89-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 附录1 EGF-Linker-TCSKDEL基因序列检测结果 | 第98-99页 |
| 附录2 中英文缩略词对照表 | 第99-101页 |
| 研究生学习期间成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
