小牛凝乳酶基因在大肠杆菌中可溶性表达研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 绪论 | 第9-26页 |
| ·课题背景 | 第9-11页 |
| ·前言 | 第9页 |
| ·凝乳酶的来源与种类 | 第9-10页 |
| ·牛凝乳酶的化学性质与结构 | 第10-11页 |
| ·凝乳酶发展概况 | 第11-13页 |
| ·重组凝乳酶发展概况 | 第13-17页 |
| ·重组凝乳酶的原核表达 | 第14-15页 |
| ·重组凝乳酶的真核表达 | 第15-16页 |
| ·重组凝乳酶的生产和应用 | 第16-17页 |
| ·重组凝乳酶存在的问题 | 第17-18页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达 | 第18-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-19页 |
| ·包涵体形成的原因 | 第19-20页 |
| ·提高蛋白可溶性表达的方法 | 第20-23页 |
| ·课题来源及研究意义 | 第23-24页 |
| ·研究主要内容 | 第24-26页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第26-36页 |
| ·实验材料 | 第26-28页 |
| ·菌种和质粒 | 第26页 |
| ·药品和试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26页 |
| ·溶液 | 第26-27页 |
| ·仪器和设备 | 第27页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| ·含目的基因重组质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·目的基因的扩增 | 第29-30页 |
| ·扩增产物的纯化/回收 | 第30页 |
| ·目的基因的克隆 | 第30-33页 |
| ·目的基因的转化 | 第33-34页 |
| ·目的基因的表达 | 第34-36页 |
| 第3章 重组表达载体的构建 | 第36-42页 |
| ·基因扩增 | 第36-37页 |
| ·载体构建 | 第37-41页 |
| ·克隆载体的构建 | 第37-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-41页 |
| ·本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 基因的表达 | 第42-56页 |
| ·表达结果分析 | 第42-48页 |
| ·初步检测 | 第42-44页 |
| ·IPTG 浓度优化 | 第44-46页 |
| ·可溶性分析 | 第46-48页 |
| ·诱导条件对蛋白可溶性表达的影响 | 第48-49页 |
| ·表达载体对蛋白可溶性表达的影响 | 第49-53页 |
| ·培养温度对表达的影响 | 第49-51页 |
| ·融合标签对表达的影响 | 第51-53页 |
| ·宿主菌对蛋白可溶性表达的影响 | 第53-54页 |
| ·凝乳酶活性检测 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 结论 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 附录1 CYM 基因密码子及对应蛋白序列 | 第64-66页 |
| 附录2 CYM 基因测序结果 | 第66-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
