| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 第一章 文献综述 植物硝酸盐代谢研究进展 | 第18-42页 |
| 1.NO_3~-同化的分子生物学基础 | 第18-27页 |
| ·高等植物的NR基因 | 第19页 |
| ·高等植物的NR基因 | 第19-27页 |
| ·NR的结构和特性 | 第19-21页 |
| ·NR基因结构 | 第21-24页 |
| ·NR基因的表达调控 | 第24-27页 |
| ·高等植物的NiR基因 | 第27页 |
| 2.NH_4~+同化分子生物学基础 | 第27-30页 |
| ·GS基因 | 第27-29页 |
| ·GS基因的结构组成 | 第28-29页 |
| ·GS基因的表达调节 | 第29页 |
| ·GOGAT基因 | 第29-30页 |
| 3.基因克隆方法研究进展 | 第30-42页 |
| ·图位克隆 | 第30-31页 |
| ·转座子标签法 | 第31-32页 |
| ·功能基因克隆 | 第32页 |
| ·差异显示基因克隆 | 第32-34页 |
| ·差异展示反转录PCR(DDRT-PCR) | 第32-33页 |
| ·cDNA代表性差异分析(RDA) | 第33-34页 |
| ·抑制性扣除杂交技术(SSH) | 第34页 |
| ·同源基因克隆 | 第34-39页 |
| ·文库筛选法 | 第34-35页 |
| ·cDNA末端快速扩增 | 第35-39页 |
| ·PCR法获得新基因的方法 | 第39-42页 |
| ·重叠延伸PCR | 第39-40页 |
| ·连续延伸PCR法 | 第40页 |
| ·基于PCR的两步PTDS方法 | 第40-42页 |
| 第二章 不同硝态氮水平对不结球白菜产量与主要营养品质及硝酸盐含量的影响 | 第42-49页 |
| ·材料与方法 | 第43-44页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-44页 |
| ·处理方法 | 第43-44页 |
| ·采样及测定 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-46页 |
| ·不同NO_3~--N水平对不结球白菜生长的影响 | 第44页 |
| ·不同NO_3~--N水平对不结球白菜不同部位硝酸盐含量的影响 | 第44-45页 |
| ·不同NO_3~--N水平对不结球白菜不同部位硝酸还原酶活性(NRA)的影响 | 第45页 |
| ·不同NO_3~--N水平对不结球白菜营养品质的影响 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·不同NO_3~--N水平与植物生长、硝酸盐积累的关系 | 第46-47页 |
| ·不同NO_3~--N水平与植物体内硝酸盐分布的关系 | 第47页 |
| ·叶片中硝酸盐积累与NRA的关系 | 第47-48页 |
| ·不同NO_3~--N水平与不结球白菜主要营养品质的关系 | 第48-49页 |
| 第三章 不结球白菜硝酸还原酶基因BcNR的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第49-70页 |
| ·材料与方法 | 第51-58页 |
| ·材料 | 第51页 |
| ·植物材料 | 第51页 |
| ·菌株与质粒 | 第51页 |
| ·各种酶类 | 第51页 |
| ·试剂盒 | 第51页 |
| ·常用储液 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-58页 |
| ·材料的准备 | 第51页 |
| ·总RNA的提取(Trizol法) | 第51-52页 |
| ·去除总RNA中痕量DNA污染 | 第52页 |
| ·sscDNA的合成 | 第52-53页 |
| ·引物的设计 | 第53-54页 |
| ·不结球白菜BcNR基因的扩增 | 第54页 |
| ·3'RACE | 第54-55页 |
| ·5'RACE | 第55-57页 |
| ·目的片段的回收、克隆 | 第57-58页 |
| ·序列测定及分析 | 第58页 |
| ·Southern杂交 | 第58页 |
| ·不结球白菜BcNR基因的原核表达 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-69页 |
| ·BcNR特异片段、5'RACE和3'RACE扩增 | 第58-63页 |
| ·推测的氨基酸序列分析 | 第63-66页 |
| ·不结球白菜BcNR二级结构和三级结构的分析 | 第66页 |
| ·不结球白菜BcNR基因的拷贝数验证 | 第66-67页 |
| ·不结球白菜BcNR基因在大肠杆菌中的表达 | 第67-69页 |
| ·讨论 | 第69-70页 |
| 第四章 不结球白菜BcNR基因的功能分析 | 第70-80页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·不结球白菜材料和菌株 | 第71页 |
| ·酶和化学试剂 | 第71页 |
| ·植物过量表达载体pCAM-BcNR的构建 | 第71-72页 |
| ·农杆菌介导法对拟南芥的转化 | 第72页 |
| ·转基因拟南芥的抗性筛选 | 第72-73页 |
| ·GUS基因活性检测(组织化学染色法) | 第73页 |
| ·转基因拟南芥的GUS-PCR检测 | 第73页 |
| ·转基因拟南芥NR基因的real-time PCR分析 | 第73-74页 |
| ·转基因拟南芥NRA测定 | 第74页 |
| ·结果与分析 | 第74-77页 |
| ·植物表达载体pCAM-BcNR的构建 | 第74-75页 |
| ·转基因阳性植株的抗性筛选和GUS检测 | 第75-76页 |
| ·转基因植株NR基因的real-time PCR分析 | 第76-77页 |
| ·转基因植株NRA测定 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| 第五章 不结球白菜亚硝酸还原酶基因BcNiR的克隆及序列分析 | 第80-90页 |
| ·材料与方法 | 第81-83页 |
| ·材料 | 第81页 |
| ·植物材料 | 第81页 |
| ·菌株与质粒 | 第81页 |
| ·各种酶类 | 第81页 |
| ·试剂盒 | 第81页 |
| ·常用储液 | 第81页 |
| ·方法 | 第81-83页 |
| ·材料的准备 | 第81-82页 |
| ·总RNA的提取 | 第82页 |
| ·sscDNA的合成 | 第82页 |
| ·引物的设计 | 第82页 |
| ·不结球白菜BcNiR基因的扩增 | 第82-83页 |
| ·序列测定及分析 | 第83页 |
| ·结果与分析 | 第83-88页 |
| ·不结球白菜BcNiR基因cDNA全长的克隆 | 第83-84页 |
| ·不结球白菜BcNiR基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第84-86页 |
| ·推测的氨基酸序列分析 | 第86-87页 |
| ·不结球白菜BcNiR的二级结构和三维结构分析 | 第87-88页 |
| ·讨论 | 第88-90页 |
| 第六章 不结球白菜细胞质型谷氨酰胺合成酶基因BcGS1的克隆及其亚细胞定位 | 第90-102页 |
| ·材料与方法 | 第91-93页 |
| ·材料 | 第91页 |
| ·植物材料 | 第91页 |
| ·菌株与质粒 | 第91页 |
| ·各种酶类 | 第91页 |
| ·试剂盒 | 第91页 |
| ·常用储液 | 第91页 |
| ·方法 | 第91-93页 |
| ·材料的准备 | 第91页 |
| ·总RNA的提取 | 第91-92页 |
| ·sscDNA的合成 | 第92页 |
| ·引物的设计 | 第92页 |
| ·不结球白菜BcGS1基因的扩增 | 第92-93页 |
| ·序列测定及分析 | 第93页 |
| ·不结球白菜BcGS1基因的亚细胞定位 | 第93页 |
| ·结果与分析 | 第93-100页 |
| ·不结球白菜BcGSI基因cDNA全长的克隆 | 第93-94页 |
| ·不结球白菜BEGSl基因eDNA中间片段RT-PCR的扩增 | 第93页 |
| ·3'RACE | 第93-94页 |
| ·5'RACE | 第94页 |
| ·不结球白菜BcGS1基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第94-96页 |
| ·推测的氨基酸序列分析 | 第96-97页 |
| ·不结球白菜BcGS1的二级结构和三级结构的分析 | 第97-98页 |
| ·不结球白菜BEGSl基因的亚细胞定位 | 第98-100页 |
| ·讨论 | 第100-102页 |
| 第七章 不结球白菜叶绿体型谷氨酰胺合成酶基因BcGS2的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第102-113页 |
| ·材料与方法 | 第103-105页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·植物材料 | 第103页 |
| ·菌株与质粒 | 第103页 |
| ·各种酶类 | 第103页 |
| ·试剂盒 | 第103页 |
| ·常用储液 | 第103-104页 |
| ·方法 | 第104-105页 |
| ·材料的准备 | 第104页 |
| ·总RNA的提取 | 第104页 |
| ·sscDNA的合成 | 第104页 |
| ·引物的设计 | 第104页 |
| ·不结球白菜BcGS2基因的扩增 | 第104-105页 |
| ·序列测定及分析 | 第105页 |
| ·不结球白菜BcGS2基因的原核表达 | 第105页 |
| ·结果与分析 | 第105-112页 |
| ·BcGS2特异片段和3'RACE扩增 | 第105-106页 |
| ·不结球白菜BcGS2基因cDNA全长的拼接及序列分析 | 第106-108页 |
| ·推测的氨基酸序列分析 | 第108-109页 |
| ·不结球白菜BcGS2的二级结构和三级结构的分析 | 第109-110页 |
| ·不结球白菜BcGS2基因在大肠杆菌中的表达 | 第110-112页 |
| ·讨论 | 第112-113页 |
| 第八章 不结球白菜氮代谢关键酶在不同氮素条件下的表达分析 | 第113-123页 |
| ·材料与方法 | 第114-116页 |
| ·植物材料 | 第114页 |
| ·方法 | 第114-116页 |
| ·处理方法 | 第114-115页 |
| ·RNA提取和鉴定 | 第115页 |
| ·去除痕量DNA污染 | 第115页 |
| ·sscDNA的合成 | 第115页 |
| ·引物的设计 | 第115-116页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第116页 |
| ·结果与分析 | 第116-121页 |
| ·不同氮素条件对BcNR基因表达的影响 | 第116-118页 |
| ·不同氮素条件对BcNiR基因表达的影响 | 第118页 |
| ·不同氮素条件对对根系中BcGS1基因表达的影响 | 第118-120页 |
| ·不同氮素条件对叶片中BcGS2基因表达的影响 | 第120-121页 |
| ·讨论 | 第121-123页 |
| 全文结论及创新点 | 第123-125页 |
| 全文结论 | 第123-124页 |
| 本文创新点 | 第124-125页 |
| 主要参考文献 | 第125-142页 |
| 致谢 | 第142-144页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第144页 |
