| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一篇 文献综述 | 第16-44页 |
| 第一章 猪链球菌2型的研究进展 | 第16-29页 |
| 1 病原学 | 第16页 |
| 2 流行病学 | 第16-17页 |
| 3 猪链球菌2型的毒力因子 | 第17-21页 |
| ·荚膜多糖(Capsular polysaccharide,CPS) | 第17-18页 |
| ·猪溶血素(suislysin,SLY) | 第18页 |
| ·溶菌酶释放蛋白(Muramidase-released protein,MRP) | 第18-19页 |
| ·胞外因子(Extracellular protein factor,EF) | 第19页 |
| ·谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH) | 第19页 |
| ·黏附素(adhesin) | 第19-20页 |
| ·纤连蛋白(Fibronectin,Fn)和血纤蛋白原(Fibrinogen,Fgn)的结合蛋白(Fibronectin and fibrinogen-bining protein,FBPS) | 第20页 |
| ·毒力相关序列orf2 | 第20页 |
| ·其他的毒力因子 | 第20-21页 |
| 4 SS2致病机制的研究 | 第21-22页 |
| ·粘附机制 | 第21页 |
| ·侵袭机制 | 第21-22页 |
| 5 猪链球菌2型感染动物模型研究进展 | 第22-23页 |
| ·斑马鱼 | 第22页 |
| ·巴马小型猪 | 第22-23页 |
| 6 猪链球菌2型蛋白质组学研究进展 | 第23页 |
| 7 猪链球菌2型的分子生物学检测方法 | 第23-25页 |
| ·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR) | 第23页 |
| ·随机扩增核酸片段多态性分析(Random amplified polymorphic DNA,RAPD) | 第23-24页 |
| ·利用16S rRNA对SS的鉴定和分群 | 第24页 |
| ·限制性内切酶图谱分析法(restriction map analysis,REA) | 第24页 |
| ·脉冲凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE) | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-29页 |
| 第二章 密度感应系统综述 | 第29-44页 |
| 1 细菌群体感应的类型 | 第29-36页 |
| ·革兰氏阴性细菌的LuxR-LuxI信号系统 | 第29-31页 |
| ·革兰氏阳性细菌的密度感应系统 | 第31-33页 |
| ·LuxS/AI-2型密度感应系统 | 第33-36页 |
| 2 LuxS/AI-2型密度感应系统的调控功能 | 第36-37页 |
| 3 密度感应系统的研究意义与应用 | 第37-40页 |
| ·降低R蛋白的活性 | 第38页 |
| ·降解信号分子 | 第38页 |
| ·阻断信号分子的合成 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 第二篇 试验研究 | 第44-110页 |
| 第三章 链球菌2型AI-2信号分子检测 | 第44-56页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·菌株与载体 | 第45页 |
| ·主要试剂与培养基 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·SS2信号分子AI-2检测 | 第46-47页 |
| ·SS2在不同生长时期AI-2信号分子检测 | 第47页 |
| ·SS2的AI-2信号分子合成基因luxS的克隆 | 第47-48页 |
| ·互补实验 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| ·SS2产生AI-2样信号分子 | 第49页 |
| ·SS2在不同生长阶段AI-2信号分子的检测 | 第49-50页 |
| ·AI-2信号分子合成基因luxS的克隆 | 第50-52页 |
| ·互补实验 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 第四章 重组蛋白LuxS与Pfs的表达与纯化 | 第56-70页 |
| 1 材料与方法 | 第57-63页 |
| ·菌种、载体与培养基 | 第57-58页 |
| ·luxS和pfs的表达 | 第58-61页 |
| ·重组LuxS和Pfs的纯化 | 第61-62页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第62页 |
| ·ELISA检测多抗效价 | 第62页 |
| ·表达产物的Western Blot检测 | 第62-63页 |
| 2 结果 | 第63-67页 |
| ·luxS与pfs的PCR扩增 | 第63页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组LuxS与Pfs的表达与纯化 | 第64-65页 |
| ·重组LuxS与Pfs多克隆抗体的制备与western blotting检测 | 第65页 |
| ·luxS与pfs在SS2中的分布检测 | 第65-67页 |
| 3 讨论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第五章 信号分子的体外合成及其影响因素 | 第70-78页 |
| 1 材料与方法 | 第70-72页 |
| ·信号分子AI-2的体外合成 | 第70-71页 |
| ·信号分子AI-2的活性检测 | 第71页 |
| ·信号分子AI-2的浓度测定 | 第71页 |
| ·温度对信号分子AI-2产生的影响 | 第71页 |
| ·pH值对信号分子AI-2重生的影响 | 第71页 |
| ·金属离子对AI-2信号分子产生的影响 | 第71-72页 |
| 2 结果 | 第72-75页 |
| ·信号分子的合成与检测 | 第72页 |
| ·信号分子体外合成的浓度检测 | 第72页 |
| ·温度对信号分子AI-2产生的影响 | 第72-73页 |
| ·pH值对信号分子AI-2重生的影响 | 第73-74页 |
| ·金属离子对AI-2信号分子产生的影响 | 第74-75页 |
| 3 讨论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
| 第六章 AI-2的产生及其与pfs及luxS转录水平分析 | 第78-88页 |
| 1 材料与方法 | 第79-80页 |
| ·不同培养条件下AI-2的检测 | 第79页 |
| ·不同培养时期AI-2的检测 | 第79页 |
| ·SS2总RNA的提取 | 第79页 |
| ·引物设计 | 第79-80页 |
| ·cDNA的合成 | 第80页 |
| ·Real-time PCR定量方法 | 第80页 |
| 2 结果 | 第80-84页 |
| ·不同培养条件下AI-2的检测 | 第80-81页 |
| ·SS2在不同生长阶段AI-2信号分子的检测 | 第81-82页 |
| ·SS2在不同生长时期luxS和pfs mRNA转录水平分析 | 第82-84页 |
| ·SS2在不同培养条件下luxS和pfs mRNA转录水平分析 | 第84页 |
| 3 讨论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-88页 |
| 第七章 噬菌体肽库筛选LuxS可能的抑制性多肽 | 第88-100页 |
| 1 材料与方法 | 第88-93页 |
| ·主要试剂 | 第89页 |
| ·噬菌体生物淘选过程 | 第89-92页 |
| ·SRH的制备 | 第92-93页 |
| ·多肽的合成 | 第93页 |
| ·多肽抑制实验 | 第93页 |
| 2 结果 | 第93-96页 |
| ·亲和性噬菌体筛选 | 第93页 |
| ·ELISA筛选阳性噬菌体 | 第93-94页 |
| ·噬菌体测序和序列分析 | 第94-95页 |
| ·多肽抑制性实验 | 第95-96页 |
| 3 讨论 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-100页 |
| 第八章 AI-2对SS2粘附性及其转录水平的影响 | 第100-110页 |
| 1 材料与方法 | 第100-103页 |
| ·细菌培养 | 第100-101页 |
| ·细胞的培养 | 第101页 |
| ·AI-2信号分子合成与浓度测定 | 第101页 |
| ·SS2对Hep-2细胞的粘附实验 | 第101-102页 |
| ·SS2对Hep-2细胞的侵袭实验 | 第102页 |
| ·荧光定量引物的设计 | 第102页 |
| ·细菌总RNA的提取 | 第102页 |
| ·cDNA合成 | 第102页 |
| ·荧光定量检测AI-2对SS2主要毒力因子的影响 | 第102-103页 |
| 2 结果 | 第103-106页 |
| ·AI-2对SS2粘附与侵袭Hep-2细胞的影响 | 第103-104页 |
| ·AI-2对pfs和luxS的转录影响 | 第104页 |
| ·AI-2对SS2主要毒力因子的转录影响 | 第104页 |
| ·AI-2对SS2几种免疫原性蛋白基因的转录影响 | 第104-106页 |
| 3 讨论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-110页 |
| 全文总结 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-114页 |
| 博士期间发表及待发表论文 | 第114页 |
