| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-27页 |
| ·链霉菌及其模式菌株天蓝色链霉菌A3(2)的概述 | 第13-14页 |
| ·链霉菌中与分化相关的调节基因 | 第14-22页 |
| ·途经专一性调节因子 | 第14-16页 |
| ·全局性调节因子 | 第16-18页 |
| ·交互调控 | 第18页 |
| ·调控网络 | 第18-22页 |
| ·天蓝色链霉菌中bldA基因的研究背景 | 第22-25页 |
| ·天蓝色链霉菌中TTA密码子的研究背景 | 第25页 |
| ·本课题研究的立论依据、目的、意义 | 第25-27页 |
| 2 材料与方法 | 第27-50页 |
| ·菌株 | 第27页 |
| ·质粒与引物 | 第27-31页 |
| ·培养基与生化试剂 | 第31-33页 |
| ·链霉菌的基本遗传操作 | 第33页 |
| ·菌种培养及保藏 | 第33页 |
| ·DNA基本操作 | 第33-35页 |
| ·大肠杆菌质粒的抽提 | 第33-34页 |
| ·链霉菌总DNA的提取 | 第34页 |
| ·氯化锂纯化DNA | 第34页 |
| ·酶连反应 | 第34-35页 |
| ·DNA片段凝胶回收(试剂盒回收) | 第35页 |
| ·PCR及相关技术 | 第35-36页 |
| ·基因片段转移技术 | 第36-38页 |
| ·大肠杆菌CaCl_2法制备感受态细胞及DNA转化 | 第36-37页 |
| ·PCR-targeting中大肠杆菌电转化感受态的制备及电转化 | 第37-38页 |
| ·大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移 | 第38页 |
| ·荧光蛋白的显微观察 | 第38页 |
| ·菌体中XYLE酶活定量测定方法 | 第38-39页 |
| ·RNA基本操作 | 第39-45页 |
| ·链霉菌的RNA抽提 | 第39-40页 |
| ·RNA样品的DNAse Ⅰ处理 | 第40-41页 |
| ·RNA样品定量 | 第41页 |
| ·RT-PCR | 第41-42页 |
| ·Northern杂交 | 第42-45页 |
| ·蛋白质操作 | 第45-50页 |
| ·IPTG诱导大肠杆菌蛋白表达 | 第45页 |
| ·用包涵体重折叠的方法纯化蛋白 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE | 第46-48页 |
| ·链霉菌总蛋白提取 | 第48页 |
| ·Western杂交 | 第48-50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-95页 |
| ·天蓝色链霉菌NSDA基因的功能研究 | 第50-81页 |
| ·nsdA基因中断载体pHL123的构建 | 第50-52页 |
| ·nsdA基因中断菌株LW9的筛选 | 第52-53页 |
| ·nsdA基因中断菌株的PCR验证 | 第53页 |
| ·nsdA基因互补载体pHL128的构建 | 第53-56页 |
| ·nsdA基因中断菌株及互补菌株的表型观察 | 第56-57页 |
| ·nsdA基因链霉菌高拷贝载体pHL122的构建 | 第57-60页 |
| ·nsdA基因高拷贝对链霉菌分化的影响 | 第60页 |
| ·nsdA启动子与egfp报告基因融合载体pHL117的构建 | 第60-63页 |
| ·nsdA表达的空间位置的EGFP荧光观察 | 第63-64页 |
| ·nsdA启动子与xylE+egfp融合双重报告载体pHL134-PnsdA的构建 | 第64-66页 |
| ·用xylE报告基因研究不同时间nsdA表达的规律 | 第66页 |
| ·用RT-PCR检测不同时间nsdA表达的规律 | 第66-68页 |
| ·用Northern Blot检测nsdA基因中断对actⅡ-orf4表达的影响 | 第68-69页 |
| ·定点突变的NsdA(S458A)对nsdA基因中断菌株的互补实验 | 第69-70页 |
| ·NsdA与NsdA(S458A)蛋白大肠杆菌与链霉菌表达载体的构建 | 第70-72页 |
| ·NsdA蛋白在大肠杆菌中的表达与纯化 | 第72页 |
| ·NsdA与NsdA(S458A)蛋白在链霉菌中表达以及磷酸化的Western杂交分析 | 第72-75页 |
| ·阿维链霉菌中nsdA直系同源基因SAV2652对天蓝色链霉菌nsdA基因中断菌株LW9的互补实验 | 第75-76页 |
| ·天蓝色链霉菌中nsdA类似基因SCO4114的基因中断载体的构建 | 第76-77页 |
| ·SCO4114基因中断菌株的PCR验证以及表型观察 | 第77-79页 |
| ·天蓝色链霉菌NsdA类似蛋白的生物信息分析 | 第79-81页 |
| ·天蓝色链霉菌含TTA密码子基因的生物信息学分析 | 第81-95页 |
| ·寻找天蓝色链霉菌中所有含TTA密码子的基因 | 第81-83页 |
| ·TTA密码子在不同生物中的的期望频率与实际频率 | 第83-85页 |
| ·含TTA密码子的基因的功能分类及与所有基因的比较 | 第85-87页 |
| ·含TTA密码子的基因的密码子使用频率与表达量预测 | 第87-89页 |
| ·含TTA密码子的基因在阿维链霉菌中的直系同源基因(orthologue) | 第89-92页 |
| ·已中断含TTA密码子的基因的总结及中断无表型的原因 | 第92-94页 |
| ·TTA密码子在链霉菌进化过程中角色的推测 | 第94-95页 |
| 4 总结与展望 | 第95-98页 |
| ·总结 | 第95-96页 |
| ·展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 附录(作者简介) | 第107页 |
