斑马鱼Z-OTU蛋白在卵子发生和胚胎发育早期的表达
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 1.前言 | 第10-27页 |
| ·斑马鱼的特性、配子发生及胚胎发育 | 第10-15页 |
| ·斑马鱼的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·斑马鱼的配子发生 | 第11-12页 |
| ·斑马鱼的受精作用 | 第12-13页 |
| ·斑马鱼的胚胎发育 | 第13-15页 |
| ·去泛素化酶(DUBs)的研究进展 | 第15-20页 |
| ·DUBs是UPP的重要组分 | 第16-18页 |
| ·DUBs的分类 | 第18-19页 |
| ·DUBs的生物学功能及研究中存在的问题 | 第19-20页 |
| ·otu基因的研究现状 | 第20-27页 |
| ·otu-related蛋白酶家族的研究进展 | 第20-21页 |
| ·果蝇otu基因的研究现状 | 第21-23页 |
| ·Z-otu基因的研究进展 | 第23-27页 |
| 2.本研究的目的意义 | 第27-28页 |
| 3.材料和方法 | 第28-40页 |
| ·试验材料 | 第28-30页 |
| ·实验动物的来源和饲养 | 第28页 |
| ·菌株 | 第28页 |
| ·工具酶、试剂盒和主要试剂 | 第28页 |
| ·主要溶液 | 第28-29页 |
| ·细菌培养基 | 第29页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞所需溶液 | 第29-30页 |
| ·小量碱法提取质粒DNA所需试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·试验方法 | 第30-40页 |
| ·试验技术路线 | 第30-31页 |
| ·表达载体的构建 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白GST-OTU1引物设计和PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR产物纯化 | 第33页 |
| ·Inoue法制备超级感受态细胞 | 第33-34页 |
| ·目的片段及表达载体的双酶切处理 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·重组质粒检测 | 第34-35页 |
| ·诱导蛋白表达 | 第35页 |
| ·表达蛋白SDS-PAGE电泳 | 第35-36页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·多克隆抗体anti-Z-OTU的制备 | 第36-37页 |
| ·双向琼脂扩散实验检测抗体的效价 | 第37页 |
| ·卵巢组织免疫组织化学 | 第37-39页 |
| ·胚胎整体荧光免疫组织化学 | 第39-40页 |
| 4.结果 | 第40-48页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第40-43页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第40页 |
| ·pGEX-6p-1载体质粒检测 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的检测 | 第41-43页 |
| ·融合蛋白诱导表达及融合蛋白的提取 | 第43-44页 |
| ·融合蛋白的诱导表达结果 | 第43页 |
| ·融合蛋白的提取 | 第43-44页 |
| ·双向免疫扩散试验 | 第44页 |
| ·免疫组化染色 | 第44-48页 |
| ·Z-OTU蛋白在卵子发生过程中的表达模式 | 第44-45页 |
| ·Z-OTU蛋白在胚胎发育早期的表达 | 第45-48页 |
| 5.讨论 | 第48-53页 |
| ·表达片段的确定 | 第48页 |
| ·表达引物的设计 | 第48页 |
| ·双酶切 | 第48-49页 |
| ·诱导条件的优化 | 第49页 |
| ·抗原的制备 | 第49页 |
| ·抗体效价的检测 | 第49-50页 |
| ·Z-OTU蛋白在斑马鱼发育过程中的作用 | 第50-53页 |
| ·Z-OTU蛋白在斑马鱼卵子发生中的作用 | 第50-51页 |
| ·Z-OTU蛋白在斑马鱼胚胎早期发育中的作用 | 第51-53页 |
| 6.小结 | 第53-54页 |
| ·本研究获得的结果及创新点 | 第53页 |
| ·本研究的不足之处和下一步值得研究的工作 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
