| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文名称及缩写词 | 第11-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-36页 |
| 1 纳豆激酶研究概述 | 第14-25页 |
| ·纳豆激酶的分子结构 | 第14-16页 |
| ·纳豆激酶的基因结构 | 第14-15页 |
| ·纳豆激酶的蛋白质结构 | 第15-16页 |
| ·纳豆激酶的生化特性 | 第16-17页 |
| ·纳豆激酶的分子量 | 第16页 |
| ·纳豆激酶的pI值 | 第16页 |
| ·纳豆激酶的稳定性 | 第16-17页 |
| ·纳豆激酶的底物特异性 | 第17页 |
| ·纳豆激酶的溶栓机制 | 第17-19页 |
| ·纳豆激酶活性测定方法 | 第19-20页 |
| ·纤维蛋白平板法 | 第19页 |
| ·纤维蛋白块溶解时间测定法 | 第19页 |
| ·四肽底物法 | 第19-20页 |
| ·血清板法 | 第20页 |
| ·酶联免疫吸附法(ELISA) | 第20页 |
| ·水解酪蛋白测定法 | 第20页 |
| ·纳豆激酶国内外开发现状 | 第20-21页 |
| ·纳豆激酶基因工程研究进展 | 第21-25页 |
| ·纳豆激酶基因的表达 | 第21-24页 |
| ·基因工程纳豆激酶的开发应用前景 | 第24-25页 |
| 2 毕赤酵母表达系统研究进展 | 第25-33页 |
| ·毕赤酵母表达外源蛋白的优点 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母表达系统的组成 | 第26-27页 |
| ·毕赤酵母表达的宿主菌 | 第26页 |
| ·毕赤酵母表达载体 | 第26-27页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第27-29页 |
| ·外源基因的特性 | 第27-28页 |
| ·载体的选择 | 第28页 |
| ·宿主菌的选择 | 第28-29页 |
| ·转化子的拷贝数 | 第29页 |
| ·表达条件 | 第29页 |
| ·密码子偏好与蛋白表达的关系 | 第29-32页 |
| ·密码子优化以提高外源蛋白在Pichia pastoris中表达水平 | 第32-33页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第33-36页 |
| 第二章 纳豆激酶第36位氨基酸突变对其活性及热稳定性的影响 | 第36-56页 |
| 1 材料与方法 | 第37-42页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-52页 |
| ·纳豆激酶基因的PCR扩增 | 第42页 |
| ·纳豆激酶基因的克隆及其鉴定 | 第42-44页 |
| ·纳豆菌DU115、BN10纳豆激酶基因序列的比较分析 | 第44-45页 |
| ·重组酵母菌的转化和鉴定结果 | 第45-47页 |
| ·纳豆激酶基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第47页 |
| ·重组纳豆激酶的分离纯化 | 第47-48页 |
| ·DNK与BNK酶学性质比较 | 第48-50页 |
| ·纳豆激酶的二级结构预测分析 | 第50-51页 |
| ·纳豆激酶成熟肽的三维结构及电子云密度分析 | 第51-52页 |
| 3 讨论 | 第52-53页 |
| 本章小结 | 第53-56页 |
| 第三章 纳豆激酶基因nkD密码子优化设计及其全基因合成 | 第56-70页 |
| 1 材料与方法 | 第57-60页 |
| ·材料 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-66页 |
| ·纳豆激酶基因synkD的合成 | 第60-65页 |
| ·synkD基因的克隆与测序结果 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| ·纳豆激酶基因nkD密码子的优化 | 第66-67页 |
| ·基因合成的方法 | 第67页 |
| ·SOEing-PCR法在合成synkD中的应用 | 第67-68页 |
| 本章小结 | 第68-70页 |
| 第四章 人工合成的纳豆激酶基因synkD在毕赤酵母中的表达及表达条件优化 | 第70-82页 |
| 1 材料与方法 | 第71-73页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·实验方法 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-79页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第73-75页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR鉴定 | 第75-76页 |
| ·synkD、nkD基因在毕赤酵母中表达的比较 | 第76页 |
| ·重组酵母菌X-synkD的表达条件优化 | 第76-79页 |
| ·重组酵母的遗传稳定性 | 第79页 |
| 3 讨论 | 第79-80页 |
| 本章小结 | 第80-82页 |
| 全文总结 | 第82-83页 |
| 论文创新之处 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-94页 |
| 附录 | 第94-106页 |
| 附录1:合成基因所用的引物 | 第94-98页 |
| 附录2:实验中部分测序报告 | 第98-104页 |
| 附录3:实验报告 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 发表论文 | 第108页 |
