| 中文摘要 | 第1-3页 |
| 英文摘要 | 第3-8页 |
| 一、引言 | 第8-18页 |
| ·质粒的主动分配机制简介 | 第8-14页 |
| ·质粒主动分配机制基因元件组织方式 | 第9-10页 |
| ·质粒主动分配机制的分类 | 第10-12页 |
| ·质粒主动分配机制的调控与具体作用方式 | 第12-13页 |
| ·质粒分配主动分配模型 | 第13-14页 |
| ·Leifsonia xyli subsp.cynodotis天然质粒pLXC100的研究 | 第14-16页 |
| ·pLXC100复制子的初步鉴定 | 第14页 |
| ·pLXC100复制子的组成 | 第14-16页 |
| ·pLXC100主动分配机制的初步推测:属于Ib型 | 第16页 |
| ·pLXC100 ParB的初步研究 | 第16-17页 |
| ·研究的意义 | 第17-18页 |
| 二、材料与方法 | 第18-40页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·酶和药品 | 第18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18页 |
| ·菌株和质粒 | 第18-20页 |
| ·引物 | 第20-21页 |
| ·DNA序列分析和蛋白序列比对及二级结构预测 | 第21页 |
| ·研究方法 | 第21-40页 |
| ·含parB基因和其突变体基因克隆的构建 | 第21-27页 |
| ·大肠杆菌感受态制备与转化 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·蛋白的表达纯化 | 第30-31页 |
| ·考马斯亮蓝进行SDS—PAGE染色 | 第31页 |
| ·SDS—PAGE胶蛋白的银染 | 第31-32页 |
| ·90bpDNA的合成与电转回收 | 第32-33页 |
| ·90bpDNA片段标记 | 第33-34页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第34-35页 |
| ·Dnase I footprinting实验 | 第35-36页 |
| ·测序胶ladder制作 | 第36-37页 |
| ·表面等离子共振(SPR) | 第37-39页 |
| ·EGS化学交联 | 第39页 |
| ·高压液相色谱(HPLC) | 第39-40页 |
| ·圆二色光谱仪检测蛋白的二级结构 | 第40页 |
| 三、结果 | 第40-51页 |
| ·ParB蛋白的二级结构预测:具有RHH(ribbon-helix-helix)结构 | 第40-41页 |
| ·表达和纯化得到完整独立的ParB蛋白 | 第41-42页 |
| ·ParB可以特异性地结合ParA基因上游的正向重复序列 | 第42-43页 |
| ·得到ParB与90bp parS的结合的动力学参数 | 第43-44页 |
| ·ParB在体外具有单体和二聚体两种存在形式 | 第44-45页 |
| ·表达和纯化得到ParB蛋白N端和C端缺失突变体蛋白 | 第45-47页 |
| ·ParB N端和C端缺失仍然具有DNA结合活性 | 第47页 |
| ·表达和纯化得到ParB蛋白β-strand段三个突变体蛋白 | 第47-49页 |
| ·ParB蛋白β-strand段第70位的赖氨酸具有重要作用 | 第49-51页 |
| 四、讨论 | 第51-56页 |
| ·研究方法的讨论 | 第51-53页 |
| ·用IMPACT-TWIN系统(New England Biolabs)表达和纯化蛋白 | 第51-52页 |
| ·SPR(Surface Plasmon Resonance)技术的应用 | 第52-53页 |
| ·实验结果的讨论 | 第53-56页 |
| ·ParB蛋白的DNA结合活性 | 第53-54页 |
| ·ParB蛋白在体外的两种存在形式 | 第54页 |
| ·N端缺失和C端缺失对ParB蛋白性质的影响 | 第54-55页 |
| ·氨基酸K70在ParB蛋白DNA结合活性方面的重要作用 | 第55-56页 |
| 五、展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-62页 |
| 硕士研究生在读期间发表及待发论文 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
