| 摘要 | 第1-3页 |
| ABSTRACT | 第3-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-29页 |
| ·引言 | 第8-10页 |
| ·基因治疗的概念 | 第8-9页 |
| ·基因治疗的策略和途径 | 第9-10页 |
| ·基因治疗的步骤 | 第10页 |
| ·基因转运递送过程 | 第10-15页 |
| ·转运递送过程的障碍 | 第10-13页 |
| ·细胞外的障碍 | 第11页 |
| ·细胞内的障碍 | 第11-13页 |
| ·基因转染过程中复合物跨越各道障碍的可能方法和途径 | 第13-15页 |
| ·非病毒转基因载体递送体系 | 第15-27页 |
| ·目前非病毒基因递送体系存在的不足 | 第15-16页 |
| ·非病毒载体 | 第16-18页 |
| ·壳聚糖及其衍生物在非病毒载体中的应用 | 第18-27页 |
| ·壳聚糖非病毒载体 | 第18-20页 |
| ·壳聚糖/DNA 复合物的制备方法 | 第18-19页 |
| ·壳聚糖作为非病毒载体用于基因转染过程的影响因素及其应用 | 第19-20页 |
| ·壳聚糖衍生物在非病毒载体中的应用 | 第20-27页 |
| ·半乳糖化壳聚糖衍生物 | 第21-22页 |
| ·季氨化的壳聚糖衍生物 | 第22页 |
| ·叶酸修饰的壳聚糖衍生物 | 第22-23页 |
| ·尿刊酸（UA）修饰的壳聚糖衍生物 | 第23-24页 |
| ·烷基化修饰的壳聚糖 | 第24-25页 |
| ·精氨酸修饰的壳聚糖（Arg-CS）基因载体 | 第25-27页 |
| ·论文工作的提出 | 第27-29页 |
| 第二章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖的制备与表征 | 第29-37页 |
| ·引言 | 第29页 |
| ·实验部分 | 第29-31页 |
| ·主要原料及仪器 | 第29-30页 |
| ·N-亚甲基磷酸化壳聚糖(NMPCS)的制备 | 第30页 |
| ·N-亚甲基磷酸化壳聚糖(NMPCS)的表征 | 第30-31页 |
| ·红外光谱（IR）分析 | 第30页 |
| ·~(13)C 核磁共振分析(NMR) | 第30-31页 |
| ·X－射线光电子能谱（XPS）分析 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-36页 |
| ·红外光谱（FT-IR）分析 | 第31-32页 |
| ·~(13)C 核磁共振分析(~(13)C NMR) | 第32-33页 |
| ·X－射线光电子能谱（XPS）分析 | 第33-36页 |
| ·结论 | 第36-37页 |
| 第三章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖NMPCS/DNA 复合物的研究 | 第37-47页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验部分 | 第37-39页 |
| ·主要原料与仪器设备 | 第37-38页 |
| ·NMPCS/DNA 纳米复合物的制备及表征 | 第38-39页 |
| ·NMPCS/DNA 纳米复合物的制备 | 第38页 |
| ·NMPCS/DNA 纳米复合物的表征 | 第38-39页 |
| ·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay) | 第38-39页 |
| ·复合物粒径检测 | 第39页 |
| ·透射电镜观察(TEM) | 第39页 |
| ·原子力显微镜观察(AFM) | 第39页 |
| ·圆二色谱分析(CD) | 第39页 |
| ·结果与讨论 | 第39-46页 |
| ·凝胶电泳阻滞实验 | 第39-41页 |
| ·透射电镜观察结果分析 | 第41-42页 |
| ·激光粒度分析仪测试复合物粒径 | 第42-43页 |
| ·原子力显微镜观察(AFM) | 第43-45页 |
| ·圆二色谱分析(CD) | 第45-46页 |
| ·结论 | 第46-47页 |
| 第四章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖介导体外基因转染研究 | 第47-68页 |
| ·引言 | 第47页 |
| ·实验部分 | 第47-50页 |
| ·实验原料及仪器 | 第47-48页 |
| ·菌体的培养及质粒的提取纯化 | 第48-50页 |
| ·配制LB 液体培养基 | 第48页 |
| ·菌体培养 | 第48页 |
| ·质粒DNA 的大量提取步骤 | 第48-50页 |
| ·DNA 小量提取步骤 | 第50页 |
| ·HeLa 及HepG2 细胞的培养 | 第50-52页 |
| ·培养液的准备 | 第50-51页 |
| ·细胞培养操作 | 第51-52页 |
| ·质粒体外转染Hela 及HepG2 细胞 | 第52-54页 |
| ·复合物的形成 | 第52页 |
| ·细胞转染及测试 | 第52-53页 |
| ·聚合物盐型NMPCS-Ca/DNA 复合物的制备及其转染研究 | 第53页 |
| ·十六烷基化壳聚糖（16－CS）与NMPCS 协同介导基因转染 | 第53页 |
| ·BCA 法测蛋白 | 第53-54页 |
| ·荧光素酶活性的确定 | 第54页 |
| ·载体及其复合物细胞毒性MTT 测试 | 第54-55页 |
| ·实验原理 | 第54页 |
| ·材料 | 第54-55页 |
| ·实验步骤 | 第55页 |
| ·实验结果与讨论 | 第55-64页 |
| ·NMPCS/DNA 复合物基因转染实验结果 | 第56-60页 |
| ·聚合物－无机盐型NMPCS-Ca/DNA 复合物转染结果 | 第60-61页 |
| ·16－CS 与NMPCS 混合载体协同介导基因转染研究 | 第61-64页 |
| ·载体的安全性初步评价——MTT 细胞毒性实验 | 第64-67页 |
| ·本章结论 | 第67-68页 |
| 全文结论 | 第68-69页 |
| 后续工作展望 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-79页 |
| 附录 | 第79-82页 |
| 攻读硕士学位期间完成的论文 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
