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N-亚甲基磷酸化修饰的壳聚糖非病毒转基因载体的研究

摘要第1-3页
ABSTRACT第3-8页
第一章 绪论第8-29页
   ·引言第8-10页
     ·基因治疗的概念第8-9页
     ·基因治疗的策略和途径第9-10页
     ·基因治疗的步骤第10页
   ·基因转运递送过程第10-15页
     ·转运递送过程的障碍第10-13页
       ·细胞外的障碍第11页
       ·细胞内的障碍第11-13页
     ·基因转染过程中复合物跨越各道障碍的可能方法和途径第13-15页
   ·非病毒转基因载体递送体系第15-27页
     ·目前非病毒基因递送体系存在的不足第15-16页
     ·非病毒载体第16-18页
     ·壳聚糖及其衍生物在非病毒载体中的应用第18-27页
       ·壳聚糖非病毒载体第18-20页
         ·壳聚糖/DNA 复合物的制备方法第18-19页
         ·壳聚糖作为非病毒载体用于基因转染过程的影响因素及其应用第19-20页
       ·壳聚糖衍生物在非病毒载体中的应用第20-27页
         ·半乳糖化壳聚糖衍生物第21-22页
         ·季氨化的壳聚糖衍生物第22页
         ·叶酸修饰的壳聚糖衍生物第22-23页
         ·尿刊酸(UA)修饰的壳聚糖衍生物第23-24页
         ·烷基化修饰的壳聚糖第24-25页
         ·精氨酸修饰的壳聚糖(Arg-CS)基因载体第25-27页
   ·论文工作的提出第27-29页
第二章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖的制备与表征第29-37页
   ·引言第29页
   ·实验部分第29-31页
     ·主要原料及仪器第29-30页
     ·N-亚甲基磷酸化壳聚糖(NMPCS)的制备第30页
     ·N-亚甲基磷酸化壳聚糖(NMPCS)的表征第30-31页
       ·红外光谱(IR)分析第30页
       ·~(13)C 核磁共振分析(NMR)第30-31页
       ·X-射线光电子能谱(XPS)分析第31页
   ·结果与讨论第31-36页
     ·红外光谱(FT-IR)分析第31-32页
     ·~(13)C 核磁共振分析(~(13)C NMR)第32-33页
     ·X-射线光电子能谱(XPS)分析第33-36页
   ·结论第36-37页
第三章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖NMPCS/DNA 复合物的研究第37-47页
   ·引言第37页
   ·实验部分第37-39页
     ·主要原料与仪器设备第37-38页
     ·NMPCS/DNA 纳米复合物的制备及表征第38-39页
       ·NMPCS/DNA 纳米复合物的制备第38页
       ·NMPCS/DNA 纳米复合物的表征第38-39页
         ·凝胶电泳阻滞实验(Gel Retardation Assay)第38-39页
         ·复合物粒径检测第39页
         ·透射电镜观察(TEM)第39页
         ·原子力显微镜观察(AFM)第39页
         ·圆二色谱分析(CD)第39页
   ·结果与讨论第39-46页
     ·凝胶电泳阻滞实验第39-41页
     ·透射电镜观察结果分析第41-42页
     ·激光粒度分析仪测试复合物粒径第42-43页
     ·原子力显微镜观察(AFM)第43-45页
     ·圆二色谱分析(CD)第45-46页
   ·结论第46-47页
第四章 N-亚甲基磷酸化壳聚糖介导体外基因转染研究第47-68页
   ·引言第47页
   ·实验部分第47-50页
     ·实验原料及仪器第47-48页
     ·菌体的培养及质粒的提取纯化第48-50页
       ·配制LB 液体培养基第48页
       ·菌体培养第48页
       ·质粒DNA 的大量提取步骤第48-50页
       ·DNA 小量提取步骤第50页
   ·HeLa 及HepG2 细胞的培养第50-52页
     ·培养液的准备第50-51页
     ·细胞培养操作第51-52页
   ·质粒体外转染Hela 及HepG2 细胞第52-54页
     ·复合物的形成第52页
     ·细胞转染及测试第52-53页
     ·聚合物盐型NMPCS-Ca/DNA 复合物的制备及其转染研究第53页
     ·十六烷基化壳聚糖(16-CS)与NMPCS 协同介导基因转染第53页
     ·BCA 法测蛋白第53-54页
     ·荧光素酶活性的确定第54页
   ·载体及其复合物细胞毒性MTT 测试第54-55页
     ·实验原理第54页
     ·材料第54-55页
     ·实验步骤第55页
   ·实验结果与讨论第55-64页
     ·NMPCS/DNA 复合物基因转染实验结果第56-60页
     ·聚合物-无机盐型NMPCS-Ca/DNA 复合物转染结果第60-61页
     ·16-CS 与NMPCS 混合载体协同介导基因转染研究第61-64页
   ·载体的安全性初步评价——MTT 细胞毒性实验第64-67页
   ·本章结论第67-68页
全文结论第68-69页
后续工作展望第69-70页
参考文献第70-79页
附录第79-82页
攻读硕士学位期间完成的论文第82-83页
致谢第83页

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