融合His Tag重组蛋白的基因克隆、表达及亲和纯化
| 中文摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第6-23页 |
| ·基因工程重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第6-10页 |
| ·目标基因的获得 | 第6-9页 |
| ·表达载体选择 | 第9页 |
| ·表达产物的形式 | 第9页 |
| ·包涵体的形成 | 第9-10页 |
| ·包涵体蛋白质复性 | 第10-15页 |
| ·目前常用的体外复性方法 | 第10-12页 |
| ·固定化金属亲和色谱对蛋白质的分离纯化及复性研究 | 第12-15页 |
| ·重组蛋白质简介及选择意义 | 第15-21页 |
| ·苹果酸脱氢酶 | 第15-16页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白 | 第16-18页 |
| ·核糖核酸酶 A | 第18-21页 |
| ·本文主要研究意义及内容 | 第21-23页 |
| 第二章 重组质粒的构建 | 第23-46页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·菌种和载体 | 第23-24页 |
| ·工具酶及分子量参照物 | 第24页 |
| ·主要化学试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24-25页 |
| ·引物合成 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-34页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第25-31页 |
| ·重组质粒的构建 | 第31-32页 |
| ·将连接产物转入大肠杆菌及阳性菌落的筛选 | 第32-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-45页 |
| ·pET28a-MDH 重组质粒构建 | 第34-37页 |
| ·pET28a-EGFP重组质粒构建 | 第37-42页 |
| ·pET28a-RNase A 重组质粒构建 | 第42-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 重组蛋白质的表达及色谱纯化初探 | 第46-72页 |
| ·实验材料和设备 | 第46-47页 |
| ·设备 | 第46-47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-52页 |
| ·外源蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第47-49页 |
| ·SDS－丙烯酰胺凝胶凝胶电泳检测表达产物 | 第49-50页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第50-51页 |
| ·固定化金属亲和色谱的蛋白纯化 | 第51页 |
| ·苹果酸脱氢酶活性检测方法 | 第51-52页 |
| ·荧光测定 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-71页 |
| ·苹果酸脱氢酶的表达及纯化 | 第52-62页 |
| ·增强型绿色荧光蛋白的表达及纯化 | 第62-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 结论与展望 | 第72-74页 |
| ·结论 | 第72页 |
| ·展望 | 第72-74页 |
| 附录 | 第74-79页 |
| 参考文献 | 第79-85页 |
| 攻读硕士期间发表（含在审）论文 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
