第一章 绪论 | 第1-15页 |
·研究背景、目的和意义 | 第12-13页 |
·研究内容与方法 | 第13-15页 |
第二章 猪水疱病病毒衣壳蛋白基因的克隆与序列分析 | 第15-24页 |
·材料与方法 | 第16-20页 |
·细胞、毒株、工程菌株和质粒 | 第16页 |
·引物的设计与合成 | 第16-18页 |
·病毒RNA的提取 | 第18页 |
·反转录合成cDNA第一链 | 第18页 |
·PCR扩增cDNA | 第18-19页 |
·cDNA的克隆、鉴定及测序 | 第19页 |
·衣壳蛋白基因核苷酸及其推导的氨基酸序列的比较分析 | 第19页 |
·系统进化树分析 | 第19-20页 |
·结果与讨论 | 第20-24页 |
·SVDV HK'70株衣壳蛋白基因RNA的RT-PCR扩增和cDNA克隆 | 第20页 |
·SVOV HK'70株衣壳蛋白基因序列分析 | 第20-21页 |
·系统进化树分析 | 第21-24页 |
第三章 猪水疱病病毒衣壳蛋白的二级结构和抗原表位预测 | 第24-32页 |
·材料与方法 | 第25页 |
·SVDV衣壳蛋白氨基酸序列 | 第25页 |
·SVOV衣壳蛋白二级结构预测 | 第25页 |
·SVDV衣壳蛋白B细胞抗原表位的预测 | 第25页 |
·结果 | 第25-30页 |
·SVDV VP1蛋白的二级结构和抗原表位 | 第25-27页 |
·SVDV VP2蛋白的二级结构和抗原表位 | 第27-28页 |
·SVDV VP3蛋白的二级结构和抗原表位 | 第28-30页 |
·讨论 | 第30-32页 |
第四章 猪水疱病病毒衣壳蛋白基因真核复制子载体的构建和体外表达 | 第32-41页 |
·材料与方法 | 第33-37页 |
·细胞、菌株和质粒 | 第33-34页 |
·主要试剂 | 第34页 |
·引物的设计和合成 | 第34页 |
·重组真核复制子载体的构建 | 第34-35页 |
·重组质粒的制备和纯化 | 第35-36页 |
·BHK-21细胞的转染 | 第36页 |
·RT-PCR法检测转染细胞目的基因的表达 | 第36页 |
·间接免疫荧光检测 | 第36页 |
·双抗体夹心ELISA检测 | 第36-37页 |
·结果 | 第37-39页 |
·目的基因的获得 | 第37页 |
·真核表达质粒的构建及鉴定 | 第37页 |
·重组质粒的序列测定及分析 | 第37页 |
·RT-PCR法检测结果 | 第37-38页 |
·间接免疫荧光检测结果 | 第38页 |
·双抗体夹心ELISA检测 | 第38-39页 |
·讨论 | 第39-41页 |
第五章 猪水疱病病毒衣壳蛋白基因自杀性DNA疫苗对豚鼠的免疫效果研究 | 第41-49页 |
·材料与方法 | 第42-45页 |
·细胞、病毒、质粒和实验动物 | 第42-43页 |
·主要试剂 | 第43页 |
·质粒大量提取 | 第43页 |
·实验动物免疫 | 第43页 |
·SVDV特异抗体的检测 | 第43-44页 |
·血清中和抗体的检测 | 第44页 |
·豚鼠淋巴细胞增殖试验 | 第44-45页 |
·结果 | 第45-46页 |
·SVDV特异抗体的产生 | 第45页 |
·血清中和抗体的检测 | 第45-46页 |
·淋巴细胞增殖试验 | 第46页 |
·讨论 | 第46-49页 |
第六章 猪水疱病病毒衣壳蛋白基因自杀性DNA疫苗对猪的免疫保护试验 | 第49-58页 |
·材料和方法 | 第50-53页 |
·细胞、病毒、质粒和实验动物 | 第50页 |
·主要试剂 | 第50-51页 |
·免疫用质粒的制备 | 第51页 |
·实验动物免疫 | 第51页 |
·SVDV特异性抗体检测 | 第51页 |
·血清中和抗体的检测 | 第51-52页 |
·淋巴细胞增殖试验 | 第52-53页 |
·攻毒保护试验 | 第53页 |
·结果 | 第53-55页 |
·SVDV特异性抗体的检测 | 第53-54页 |
·血清中和抗体的检测 | 第54-55页 |
·淋巴细胞增殖试验 | 第55页 |
·攻毒保护试验 | 第55页 |
·讨论 | 第55-58页 |
第七章 结论 | 第58-59页 |
第八章 文献综述 | 第59-76页 |
·猪水疱病研究进展 | 第59-71页 |
·猪水疱病的历史和流行概况 | 第59-60页 |
·猪水疱病的病原学特性 | 第60-61页 |
·发病机理和临床症状 | 第61-63页 |
·猪水疱病的流行病学特性 | 第63-64页 |
·诊断 | 第64-66页 |
·猪水疱病病毒的分子生物学特性 | 第66-71页 |
·自杀性DNA疫苗 | 第71-76页 |
·甲病毒的特点 | 第71-72页 |
·甲病毒复制子载体的构成和特点 | 第72-73页 |
·自杀性DNA疫苗的优点 | 第73页 |
·自杀性DNA疫苗诱导细胞凋亡的机理及其免疫机理 | 第73-74页 |
·自杀性DNA疫苗的初步应用 | 第74-75页 |
·存在的问题和展望 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
作者简历 | 第87-88页 |