| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-9页 |
| 中英文名词及缩写 | 第9-11页 |
| 前言 | 第11-13页 |
| 第一部分 实时定量PCR检测血中大肠杆菌DNA的方法学及临床标本验证 | 第13-59页 |
| 一、实验材料 | 第13-16页 |
| (一) 主要仪器 | 第13-14页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第14-15页 |
| (三) LB培养基的制备 | 第15-16页 |
| (四) 菌种来源 | 第16页 |
| (五) 标本采集 | 第16页 |
| 二、实验方法 | 第16-44页 |
| (一) 大肠杆菌引物和探针设计 | 第16-17页 |
| (二) 基因组DNA的提取 | 第17-19页 |
| (三) 引物有效性的验证 | 第19-21页 |
| (四) 引物特异性验证 | 第21页 |
| (五) 探针有效性及特异性验证 | 第21页 |
| (六) 标准品质粒的制备 | 第21-30页 |
| (七) 实时定量PCR引物浓度优化 | 第30-38页 |
| (八) 探针浓度优化 | 第38-39页 |
| (九) 实时定量PCR反应体系建立及实验流程 | 第39-42页 |
| (十) 灵敏度测试 | 第42页 |
| (十一) 线性标准曲线建立 | 第42页 |
| (十二) 仪器准确性及重复性测试 | 第42-43页 |
| (十三) 人血标本中细菌DNA提取效率测定 | 第43页 |
| (十四) 标本存放稳定性的监测 | 第43页 |
| (十五) 实时定量PCR对临床标本大肠杆菌的检测 | 第43页 |
| (十六) 统计学处理 | 第43-44页 |
| 三、实验结果 | 第44-56页 |
| (一) 引物和探针特异性验证 | 第44-45页 |
| (二) 实时定量PCR引物和探针优化浓 | 第45页 |
| (三) 标准品质粒制备 | 第45页 |
| (四) 标准曲线线性范围 | 第45-47页 |
| (五) 灵敏度测定 | 第47-51页 |
| (六) 仪器的准确性及重复性 | 第51-52页 |
| (七) 血标本中细菌DNA提取效率 | 第52页 |
| (八) 储存标本的稳定性 | 第52-53页 |
| (九) 临床标本检测结果 | 第53-56页 |
| 四、讨论 | 第56-59页 |
| 第二部分 实时定量PCR研究外科发热患者静脉血中大肠杆菌含量与体征及化验的相关性 | 第59-78页 |
| 一、实验材料 | 第59-61页 |
| (一) 主要仪器 | 第59-60页 |
| (二) 试剂及耗材 | 第60页 |
| (三) 菌种来源 | 第60页 |
| (四) 标本采集 | 第60-61页 |
| 二、实验方法 | 第61-62页 |
| (一) 标本细菌培养 | 第61页 |
| (二) 体征观察和实验室检测 | 第61页 |
| (三) 基因组DNA的提取 | 第61页 |
| (四) 实时定量PCR方法 | 第61页 |
| (五) 检测限的确定 | 第61-62页 |
| (六) 临床标本检测 | 第62页 |
| (七) 统计学处理 | 第62页 |
| 三、实验结果 | 第62-72页 |
| (一) 检测限 | 第62-68页 |
| (二) 全血大肠杆菌DNA定量检测与细菌培养比较 | 第68-69页 |
| (三) 两个时间点大肠杆菌DNA的关系 | 第69页 |
| (四) 大肠杆菌DNA含量与体温、心率、白细胞计数、中性粒细胞比率、淋巴细胞比率的相关性 | 第69-72页 |
| 四、讨论 | 第72-78页 |
| 文献综述一 | 第78-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 个人简历 | 第95页 |
