| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章：前言 | 第8-19页 |
| ·植物乙烯生物合成途径 | 第8页 |
| ·植物ACO的研究进展 | 第8-13页 |
| ·ACO基因的克隆 | 第8-9页 |
| ·植物组织ACO的分离纯化及生化特性 | 第9-10页 |
| ·ACO在细胞中的定位 | 第10页 |
| ·ACO的体外表达 | 第10-12页 |
| ·植物ACO基因的应用 | 第12-13页 |
| ·乙烯对甘蔗生长生育的调控 | 第13-15页 |
| ·外源乙烯在甘蔗生产上的应用 | 第13-14页 |
| ·乙烯对甘蔗生长发育调控机理的生理生化研究 | 第14-15页 |
| ·甘蔗的遗传转化方法 | 第15-17页 |
| ·基因枪法 | 第16页 |
| ·电击法 | 第16页 |
| ·农杆菌介导法 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的意义 | 第17-19页 |
| 第二章：甘蔗ACO cDNA的克隆、基因结构分析及植物表达载体构建 | 第19-38页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·试验材料 | 第19页 |
| ·菌种和质粒 | 第19页 |
| ·酶与试剂 | 第19-20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-32页 |
| ·本研究的技术路线 | 第20-25页 |
| ·甘蔗总RNA的提取 | 第25页 |
| ·甘蔗总DNA的提取 | 第25页 |
| ·甘蔗ACO cDNA和DNA引物的设计及PCR扩增 | 第25-27页 |
| ·甘蔗ACO cDNA和DNA PCR产物纯化 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(RuCl_2法) | 第27-28页 |
| ·甘蔗ACO cDNA和DNA的目的片段与克隆载体的连接反应 | 第28页 |
| ·连接产物对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第28页 |
| ·质粒的小量制备 | 第28页 |
| ·阳性克隆的筛选和酶切验证 | 第28-29页 |
| ·克隆载体上PCR产物的测序 | 第29页 |
| ·质粒DNA对大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第29页 |
| ·质粒DNA的大量制备 | 第29页 |
| ·菌体电泳初步筛选重组质粒 | 第29-30页 |
| ·含甘蔗ACO cDNA的中间载体的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| ·甘蔗ACO cDNA正义、反义植物表达载体的构建与鉴定 | 第31-32页 |
| ·结果与分析 | 第32-37页 |
| ·甘蔗ACO cDNA的RT-PCR扩增 | 第32页 |
| ·甘蔗ACO DNA的PCR扩增 | 第32-33页 |
| ·PCR产物的克隆酶切分析 | 第33-34页 |
| ·甘蔗ACO cDNA的序列比较分析 | 第34-35页 |
| ·甘蔗ACO DNA的序列分析 | 第35-36页 |
| ·含甘蔗ACO cDNA的正义、反义中间载体的酶切验证 | 第36页 |
| ·甘蔗ACO cDNA正、反义植物表达载体的酶切验证 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-38页 |
| ·甘蔗ACO cDNA序列分析 | 第37页 |
| ·甘蔗ACO DNA序列分析 | 第37页 |
| ·甘蔗ACO cDNA植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 第三章：甘蔗ACO cDNA在大肠杆菌中的表达及酶学性质鉴定 | 第38-52页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第38页 |
| ·试剂 | 第38页 |
| ·主要仪器设备 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-44页 |
| ·甘蔗ACO cDNA大肠杆菌表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·甘蔗ACO cDNA在E.coli BL21(DE3)plysS中的表达 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第40页 |
| ·包涵体蛋白的确定 | 第40页 |
| ·包涵体的溶解与变性 | 第40-41页 |
| ·包涵体蛋白的复性 | 第41页 |
| ·金属鳌合层析纯化目的蛋白 | 第41页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第41-42页 |
| ·重组甘蔗ACO的活性测定 | 第42-43页 |
| ·重组甘蔗ACO的酶学性质研究 | 第43-44页 |
| ·结果与分析 | 第44-50页 |
| ·甘蔗ACO cDNA大肠杆菌表达载体的构建 | 第44-45页 |
| ·pET30a-SgACO在E.coli BL21(DE3)plysS中的高效表达及SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·包涵体的确定及溶解变性 | 第45-46页 |
| ·重组甘蔗ACO包涵体蛋白的Ni~(2+)-NTA金属螯合层析纯化结果分析 | 第46-47页 |
| ·重组甘蔗ACO酶学性质鉴定 | 第47-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| ·重组ACO在大肠杆菌中的表达 | 第50页 |
| ·包涵体蛋白的纯化与复性 | 第50-51页 |
| ·ACO酶活性体外测定的方法 | 第51页 |
| ·CO_2对酶活性的影响 | 第51页 |
| ·ACO的K_m值 | 第51页 |
| ·离子的抑制效应 | 第51-52页 |
| 第四章：结论与展望 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第69页 |
