中文摘要 | 第1-10页 |
ABSTRACT | 第10-13页 |
缩略词表 | 第13-15页 |
第一章 文献综述 | 第15-36页 |
·番茄概述 | 第15页 |
·番茄的植物学分类 | 第15页 |
·番茄的研究意义 | 第15页 |
·赤霉素的研究进展 | 第15-33页 |
·赤霉素简介 | 第15-16页 |
·赤霉素的生物学功能 | 第16-17页 |
·赤霉素的合成代谢途径 | 第17-19页 |
·赤霉素生物合成前体—牻牛儿牻牛儿焦磷酸的形成途径 | 第17-18页 |
·赤霉素生物合成的基本途径 | 第18-19页 |
·赤霉素生物合成途径中的关键酶 | 第19-24页 |
·珂巴焦磷酸合成酶(CPS) | 第19-20页 |
·内-贝壳杉烯合成酶(KS) | 第20页 |
·内-贝壳杉烯氧化酶(KO) | 第20-21页 |
·内-贝壳杉烯酸氧化酶(KAO) | 第21页 |
·GA 20-氧化酶(GA 20-oxidase) | 第21-22页 |
·GA 3-氧化酶(GA 3-oxidase) | 第22-23页 |
·GA Z-氧化酶(GA Z-oxidase) | 第23-24页 |
·赤霉素生物合成与代谢的调控 | 第24-28页 |
·发育阶段对 GA生物合成的调节 | 第25-26页 |
·环境因素对 GA生物合成的调节 | 第26-27页 |
·生物活性 GA的水平对 GA生物合成的调节 | 第27页 |
·其它植物激素对 GA生物合成的调节 | 第27-28页 |
·赤霉素在植物体内的运输 | 第28-29页 |
·赤霉素的信号转导 | 第29-33页 |
·GA信号转导途径中的组成元件及其功能 | 第29-32页 |
·GA的信号转导模型 | 第32-33页 |
·RNA干涉 | 第33-35页 |
·RNA干涉的作用原理 | 第33-34页 |
·RNA干涉的特点 | 第34页 |
·RNA干涉技术在基因功能研究上的应用 | 第34-35页 |
·本研究的目的意义和主要内容 | 第35-36页 |
第二章 番茄 GA 20-氧化酶基因的克隆及功能分析 | 第36-68页 |
·材料 | 第36-39页 |
·植物材料 | 第36页 |
·菌株和质粒 | 第36页 |
·主要试剂 | 第36页 |
·引物设计 | 第36-38页 |
·基本培养基 | 第38页 |
·常用溶液配方 | 第38-39页 |
·方法 | 第39-43页 |
·基因克隆、测序及分析 | 第39页 |
·RNA干涉表达载体的构建 | 第39-40页 |
·番茄的遗传转化 | 第40页 |
·植物总DNA的提取 | 第40页 |
·植物总RNA的提取 | 第40页 |
·转基因番茄植株的分子检测 | 第40页 |
·转基因番茄植株PCR检测 | 第40页 |
·转基因番茄植株的Southern杂交分析 | 第40页 |
·半定量RT-PCR分析 | 第40-41页 |
·转基因番茄植株赤霉素含量的测定 | 第41页 |
·转基因番茄植株形态指标的测定 | 第41页 |
·转基因番茄植株生理指标的测定 | 第41-43页 |
·电导率的测定 | 第41-42页 |
·叶片相对含水量 | 第42页 |
·叶绿素的提取和测定 | 第42页 |
·脯氨酸含量测定 | 第42-43页 |
·光合速率测定 | 第43页 |
·种子萌发 | 第43页 |
·石蜡切片的制作和显微结构的观测 | 第43页 |
·结果与分析 | 第43-63页 |
·番茄 GA 20-氧化酶基因的序列比对 | 第43-46页 |
·RNA干涉表达载体的构建 | 第46-47页 |
·转基因植株的获得 | 第47-48页 |
·转基因番茄植株的分子检测 | 第48-50页 |
·转基因植株的PCR检测 | 第48-49页 |
·转基因植株的Southern杂交分析 | 第49-50页 |
·番茄 GA 20-氧化酶基因在不同器官中的表达分析 | 第50-51页 |
·RNAi转基因植株的表型变化 | 第51-53页 |
·RNAi转基因植株茎和叶的形态变化 | 第51-52页 |
·GA20ox3 RNAi转基因植株根的形态变化 | 第52-53页 |
·GA 20-氧化酶基因在转基因植株不同器官中的表达分析 | 第53-54页 |
·赤霉素含量的测定和分析 | 第54-56页 |
·转基因植株形态指标的测定 | 第56-57页 |
·转基因植株叶片和茎的显微结构 | 第57-58页 |
·生理指标的测定 | 第58-60页 |
·叶绿素含量的测定 | 第58-59页 |
·光合效率测定 | 第59-60页 |
·种子萌发率的测定 | 第60-61页 |
·转基因植株抗旱性初步观察 | 第61-63页 |
·叶片相对含水量 | 第62页 |
·叶片伤害率 | 第62-63页 |
·脯氨酸的测定 | 第63页 |
·讨论 | 第63-68页 |
·RNAi的特异性和有效性 | 第63-64页 |
·GA 20-oxidase基因的功能分析 | 第64-67页 |
·通过调控 GA 20-氧化酶的表达提高植物抗逆性 | 第67-68页 |
第三章 番茄GA 2-氧化酶2基因的克隆及分析 | 第68-80页 |
·材料 | 第68-69页 |
·植物材料 | 第68页 |
·菌株、质粒和主要试剂 | 第68页 |
·引物设计 | 第68-69页 |
·方法 | 第69-70页 |
·RACE扩增 | 第69-70页 |
·基因克隆、测序及分析 | 第70页 |
·转基因植株的分子鉴定 | 第70页 |
·赤霉素含量的测定 | 第70页 |
·转基因植株的形态观察 | 第70页 |
·结果与分析 | 第70-77页 |
·番茄 GA 2-oxidase2基因全长cDNA的克隆 | 第70-72页 |
·番茄 GA 2-oxidase2基因的序列分析 | 第72-74页 |
·番茄 GA 2-oxidase2在不同器官中的表达模式 | 第74-75页 |
·RNAi表达载体的构建 | 第75页 |
·番茄遗传转化 | 第75页 |
·转基因植株的分子检测 | 第75-76页 |
·转基因植株的PCR检测 | 第75-76页 |
·Southern杂交检测 | 第76页 |
·转基因番茄的表型观测 | 第76页 |
·转基因植株的RT-PCR检测 | 第76-77页 |
·赤霉素含量的测定 | 第77页 |
·讨论 | 第77-80页 |
·生物信息学在番茄基因克隆中的应用 | 第77-78页 |
·GA 2-oxidase2的多基因家族现象 | 第78-80页 |
第四章 小结 | 第80-83页 |
参考文献 | 第83-98页 |
致谢 | 第98-99页 |
附录 | 第99-109页 |
附录一: 质粒的小量提取方法 | 第99-100页 |
附录二: 植物DNA的小量法提取程序 | 第100-101页 |
附录三: Trizol一步法提取植物总RNA方法 | 第101-102页 |
附录四: Southern Blotting程序 | 第102-106页 |
附录五: 赤霉素的提取与测定 | 第106-109页 |
附录六: 研究生期间已发表或接受的论文及会议论文摘要 | 第109页 |