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番茄GA 20-氧化酶和GA 2-氧化酶基因的克隆与功能分析

中文摘要第1-10页
ABSTRACT第10-13页
缩略词表第13-15页
第一章 文献综述第15-36页
   ·番茄概述第15页
     ·番茄的植物学分类第15页
     ·番茄的研究意义第15页
   ·赤霉素的研究进展第15-33页
     ·赤霉素简介第15-16页
     ·赤霉素的生物学功能第16-17页
     ·赤霉素的合成代谢途径第17-19页
       ·赤霉素生物合成前体—牻牛儿牻牛儿焦磷酸的形成途径第17-18页
       ·赤霉素生物合成的基本途径第18-19页
     ·赤霉素生物合成途径中的关键酶第19-24页
       ·珂巴焦磷酸合成酶(CPS)第19-20页
       ·内-贝壳杉烯合成酶(KS)第20页
       ·内-贝壳杉烯氧化酶(KO)第20-21页
       ·内-贝壳杉烯酸氧化酶(KAO)第21页
       ·GA 20-氧化酶(GA 20-oxidase)第21-22页
       ·GA 3-氧化酶(GA 3-oxidase)第22-23页
       ·GA Z-氧化酶(GA Z-oxidase)第23-24页
     ·赤霉素生物合成与代谢的调控第24-28页
       ·发育阶段对 GA生物合成的调节第25-26页
       ·环境因素对 GA生物合成的调节第26-27页
       ·生物活性 GA的水平对 GA生物合成的调节第27页
       ·其它植物激素对 GA生物合成的调节第27-28页
     ·赤霉素在植物体内的运输第28-29页
     ·赤霉素的信号转导第29-33页
       ·GA信号转导途径中的组成元件及其功能第29-32页
       ·GA的信号转导模型第32-33页
   ·RNA干涉第33-35页
     ·RNA干涉的作用原理第33-34页
     ·RNA干涉的特点第34页
     ·RNA干涉技术在基因功能研究上的应用第34-35页
   ·本研究的目的意义和主要内容第35-36页
第二章 番茄 GA 20-氧化酶基因的克隆及功能分析第36-68页
   ·材料第36-39页
     ·植物材料第36页
     ·菌株和质粒第36页
     ·主要试剂第36页
     ·引物设计第36-38页
     ·基本培养基第38页
     ·常用溶液配方第38-39页
   ·方法第39-43页
     ·基因克隆、测序及分析第39页
     ·RNA干涉表达载体的构建第39-40页
     ·番茄的遗传转化第40页
     ·植物总DNA的提取第40页
     ·植物总RNA的提取第40页
     ·转基因番茄植株的分子检测第40页
       ·转基因番茄植株PCR检测第40页
       ·转基因番茄植株的Southern杂交分析第40页
     ·半定量RT-PCR分析第40-41页
     ·转基因番茄植株赤霉素含量的测定第41页
     ·转基因番茄植株形态指标的测定第41页
     ·转基因番茄植株生理指标的测定第41-43页
       ·电导率的测定第41-42页
       ·叶片相对含水量第42页
       ·叶绿素的提取和测定第42页
       ·脯氨酸含量测定第42-43页
       ·光合速率测定第43页
     ·种子萌发第43页
     ·石蜡切片的制作和显微结构的观测第43页
   ·结果与分析第43-63页
     ·番茄 GA 20-氧化酶基因的序列比对第43-46页
     ·RNA干涉表达载体的构建第46-47页
     ·转基因植株的获得第47-48页
     ·转基因番茄植株的分子检测第48-50页
       ·转基因植株的PCR检测第48-49页
       ·转基因植株的Southern杂交分析第49-50页
     ·番茄 GA 20-氧化酶基因在不同器官中的表达分析第50-51页
     ·RNAi转基因植株的表型变化第51-53页
       ·RNAi转基因植株茎和叶的形态变化第51-52页
       ·GA20ox3 RNAi转基因植株根的形态变化第52-53页
     ·GA 20-氧化酶基因在转基因植株不同器官中的表达分析第53-54页
     ·赤霉素含量的测定和分析第54-56页
     ·转基因植株形态指标的测定第56-57页
     ·转基因植株叶片和茎的显微结构第57-58页
     ·生理指标的测定第58-60页
       ·叶绿素含量的测定第58-59页
       ·光合效率测定第59-60页
     ·种子萌发率的测定第60-61页
     ·转基因植株抗旱性初步观察第61-63页
       ·叶片相对含水量第62页
       ·叶片伤害率第62-63页
       ·脯氨酸的测定第63页
   ·讨论第63-68页
     ·RNAi的特异性和有效性第63-64页
     ·GA 20-oxidase基因的功能分析第64-67页
     ·通过调控 GA 20-氧化酶的表达提高植物抗逆性第67-68页
第三章 番茄GA 2-氧化酶2基因的克隆及分析第68-80页
   ·材料第68-69页
     ·植物材料第68页
     ·菌株、质粒和主要试剂第68页
     ·引物设计第68-69页
   ·方法第69-70页
     ·RACE扩增第69-70页
     ·基因克隆、测序及分析第70页
     ·转基因植株的分子鉴定第70页
     ·赤霉素含量的测定第70页
     ·转基因植株的形态观察第70页
   ·结果与分析第70-77页
     ·番茄 GA 2-oxidase2基因全长cDNA的克隆第70-72页
     ·番茄 GA 2-oxidase2基因的序列分析第72-74页
     ·番茄 GA 2-oxidase2在不同器官中的表达模式第74-75页
     ·RNAi表达载体的构建第75页
     ·番茄遗传转化第75页
     ·转基因植株的分子检测第75-76页
       ·转基因植株的PCR检测第75-76页
       ·Southern杂交检测第76页
     ·转基因番茄的表型观测第76页
     ·转基因植株的RT-PCR检测第76-77页
     ·赤霉素含量的测定第77页
   ·讨论第77-80页
     ·生物信息学在番茄基因克隆中的应用第77-78页
     ·GA 2-oxidase2的多基因家族现象第78-80页
第四章 小结第80-83页
参考文献第83-98页
致谢第98-99页
附录第99-109页
 附录一: 质粒的小量提取方法第99-100页
 附录二: 植物DNA的小量法提取程序第100-101页
 附录三: Trizol一步法提取植物总RNA方法第101-102页
 附录四: Southern Blotting程序第102-106页
 附录五: 赤霉素的提取与测定第106-109页
 附录六: 研究生期间已发表或接受的论文及会议论文摘要第109页

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