| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 研究背景与研究目标 | 第14-30页 |
| 1. 鱼类促性腺激素的研究 | 第14-20页 |
| ·鱼类促性腺激素的结构 | 第14-15页 |
| ·鱼类促性腺激素的生理功能 | 第15-17页 |
| ·鱼类促性腺激素基因的克隆与天然蛋白的分离纯化 | 第17-18页 |
| ·鱼类垂体蛋白包括GtH的纯化及检测技术的建立现状分析 | 第18-20页 |
| 2. RNA 选择性剪接的研究 | 第20-28页 |
| ·RNA 选择性剪接的发现 | 第20-22页 |
| ·RNA 选择性剪接的位置特征 | 第22-23页 |
| ·RNA 选择性剪接的类型 | 第23-26页 |
| ·RNA 选择性剪接的功能 | 第26页 |
| ·RNA 选择性剪接与信号肽 | 第26-28页 |
| ·RNA 选择性剪接现象在生殖相关基因中的发现 | 第28页 |
| 3 研究目标 | 第28-30页 |
| 第二章 鲤鱼促性腺激素基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备 | 第30-45页 |
| 1 材料和方法 | 第31-38页 |
| ·实验鱼和取材 | 第31页 |
| ·鲤鱼 GtH 亚基cDNA 的克隆 | 第31-33页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第33页 |
| ·原核表达、SDS-PAGE 和 Western-blot 分析 | 第33-36页 |
| ·多克隆抗体的制备及鉴定 | 第36页 |
| ·免疫印迹分析 | 第36-37页 |
| ·酶联免疫分析 | 第37-38页 |
| ·冰冻切片的抗体荧光原位杂交 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-43页 |
| ·鲤鱼GtHIβ、GtHIIβ和GtHα亚基的克隆 | 第38-39页 |
| ·重组鲤鱼 GtH 亚基表达的融合蛋白及鉴定 | 第39-40页 |
| ·GtH 亚基多克隆抗体的获得 | 第40-41页 |
| ·制备的兔抗血清对天然蛋白的识别 | 第41-42页 |
| ·制备的多抗与垂体和卵巢切片进行的免疫荧光反应 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 鲤鱼脑垂体总蛋白的纯化 | 第45-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第46-49页 |
| ·材料鱼 | 第46页 |
| ·电脑分析 | 第46页 |
| ·垂体的制备 | 第46-47页 |
| ·总蛋白的提取 | 第47页 |
| ·脱盐换Buffer | 第47页 |
| ·亲和柱层析 | 第47-48页 |
| ·离子交换层析 | 第48页 |
| ·疏水层析 | 第48页 |
| ·分子筛层析 | 第48-49页 |
| ·冷冻干燥 | 第49页 |
| ·目标蛋白的鉴定 | 第49页 |
| 2. 结果 | 第49-54页 |
| ·鲤鱼促性腺激素的分析 | 第49页 |
| ·鲤鱼垂体总蛋白 | 第49页 |
| ·亲和层析组分 | 第49-50页 |
| ·糖蛋白的离子交换层析组分 | 第50-51页 |
| ·糖蛋白的疏水层析组分 | 第51页 |
| ·非糖蛋白的离子交换组分 | 第51页 |
| ·非糖蛋白的疏水层析组分 | 第51-52页 |
| ·分子筛 | 第52-53页 |
| ·目标蛋白的Western-blot检测结果 | 第53-54页 |
| 3 讨论 | 第54-56页 |
| 第四章 鲤鱼(Cyprinus Carpio)促性腺激素α亚基新转录本的发现及特性 | 第56-75页 |
| 1. 材料与方法 | 第58-62页 |
| ·材料鱼 | 第58页 |
| ·RNA提取及RT-PCR | 第58页 |
| ·RT-PCR确证 | 第58页 |
| ·氨基酸序列分析 | 第58页 |
| ·真核表达 | 第58-59页 |
| ·免疫共沉淀 | 第59-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-73页 |
| ·GtHα新选择性剪接的发现 | 第62-65页 |
| ·新转录本在垂体和卵巢中都存在 | 第65-67页 |
| ·新转录本缺少信号肽 | 第67-69页 |
| ·GtH-α291 分泌不出细胞 | 第69-70页 |
| ·GtH-α291与GtHIβ和GtHIIβ均能结合 | 第70-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 第五章 总结 | 第75-78页 |
| 参考文献 | 第78-90页 |
| 附录 | 第90-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
