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条锈菌诱导的小麦抑制差减杂交文库构建(SSH)及其表达序列标签(ESTs)研究

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
第一章 文献综述第13-51页
   ·小麦条锈病的危害及研究现状第13-17页
     ·小麦条锈病的危害第13页
     ·小麦条锈病的研究现状第13-17页
   ·植物抗病的分子机制第17-25页
     ·植物抗病基因研究进展第17-20页
     ·植物过敏性反应研究进展第20-23页
     ·植物系统获得抗病性(SAR)研究进展第23-24页
     ·植物抗病基因介导的信号途径第24-25页
   ·差减杂交技术、表达序列标签技术及其应用第25-35页
     ·差减杂交技术第25-31页
     ·表达序列标签(ESTs)技术第31-35页
   ·生物信息学与ESTS 研究第35-42页
     ·生物信息学的产生和定义第35-36页
     ·生物信息学的国内外研究现状第36-37页
     ·生物信息学数据库的特点第37页
     ·生物信息学在ESTs 研究中的应用第37-42页
   ·实时荧光定量PCR 技术第42-49页
     ·PCR 技术从定性到定量的飞跃第42页
     ·实时荧光定量PCR 技术原理第42-43页
     ·荧光化学第43-46页
     ·定量方法第46-48页
     ·荧光定量PCR 技术在植物上的应用第48-49页
   ·本研究的目的及意义第49-50页
   ·技术路线第50-51页
第二章 小麦不同器官总RNA 含量及不同提取方法的比较第51-58页
   ·材料与方法第51-54页
     ·生化试剂第51-52页
     ·试验仪器第52页
     ·植物材料第52页
     ·小麦叶片总RNA 提取第52-53页
     ·总RNA 中基因组DNA 的去除第53-54页
     ·小麦叶片总RNA 的浓度及纯度检测第54页
     ·小麦叶片总RNA 的完整性检测第54页
   ·结果与分析第54-56页
     ·小麦叶片总RNA 浓度及纯度检测第54-55页
     ·不同器官总RNA 完整性检测第55-56页
   ·结论与讨论第56-58页
第三章 条锈菌诱导的小麦SSH 文库构建及ESTS 大规模生物信息学分析第58-85页
   ·材料与方法第58-68页
     ·主要仪器与试剂第58-59页
     ·供试菌种和小麦品种第59页
     ·接种和培养第59页
     ·取样量及取样时间第59页
     ·总RNA 提取与mRNA 分离纯化第59-60页
     ·抑制差减杂交第60-65页
     ·PCR 产物的纯化第65页
     ·PCR 产物的载体连接反应第65页
     ·感受态细胞的制备及连接产物的转化第65-66页
     ·文库重组率检测第66页
     ·文库片段大小检测第66页
     ·大规模质粒提取第66-67页
     ·序列测定第67页
     ·序列分析第67-68页
   ·结果与分析第68-79页
     ·总RNA 提取结果第68页
     ·RNA 浓度及纯度测定第68页
     ·mRNA 质量检测结果第68页
     ·抑制差减杂交检测结果第68-70页
     ·SSH cDNA 文库质量评价及测序结果第70-72页
     ·ESTs 获得与分析第72-79页
   ·结论与讨论第79-85页
     ·高质量RNA 是构建高质量文库的基础第79页
     ·SSH 文库的质量检测第79-80页
     ·SSH 技术的优缺点第80-81页
     ·小麦接种条锈菌初期参与抗病过程的相关基因第81-85页
第四章 小麦抗病相关基因的表达分析第85-97页
   ·材料与方法第85-90页
     ·小麦材料第85页
     ·生化试剂及仪器第85页
     ·菌株第85-86页
     ·小麦叶片总RNA 的提取第86页
     ·四条抗病相关ESTs 的反转录PCR 表达情况分析第86-87页
     ·三条抗病相关基因的荧光定量检测第87-90页
   ·结果与分析第90-95页
     ·反转录PCR 验证抗病相关基因的表达情况第90-91页
     ·荧光定量PCR 检测抗病相关基因的表达模式第91-95页
   ·结论与讨论第95-97页
第五章 两条小麦抗病相关基因的克隆及其生物信息学分析第97-119页
   ·材料与方法第97-101页
     ·两个小麦抗病相关基因的电子克隆及分析第97-98页
     ·两个抗病相关基因的RACE 全长克隆及分析第98-101页
   ·结果与分析第101-116页
     ·抗病性相关基因的电子克隆第101-105页
     ·RACE 全长基因及其生物信息学分析第105-116页
   ·结论与讨论第116-119页
     ·电子克隆技术应用于小麦基因克隆的可行性及其优缺点第116页
     ·RACE 技术的优缺点第116-117页
     ·过敏性反应诱导蛋白第117-118页
     ·神经鞘氨醇酶第118-119页
结论第119-120页
参考文献第120-133页
附录第133-143页
致谢第143-144页
作者简介第144页

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