| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一篇 论文综述部分 基因工程抗体的研究进展 | 第6-35页 |
| 前言 | 第7页 |
| 1. 基因工程抗体的分类 | 第7-12页 |
| ·鼠单抗的人源化 | 第8-9页 |
| ·小分子抗体 | 第9-10页 |
| ·抗体融合蛋白 | 第10-11页 |
| ·双特异性抗体 | 第11-12页 |
| 2. 单链抗体 | 第12-18页 |
| ·单链抗体的设计和构建 | 第13-14页 |
| ·ScFv融合蛋白的构建 | 第14-15页 |
| ·单链抗体的表达 | 第15-16页 |
| ·单链抗体的应用 | 第16-18页 |
| 3. 胞内抗体 | 第18-24页 |
| ·胞内抗体的设计及载体选择 | 第18-19页 |
| ·胞内抗体与肿瘤基因治疗 | 第19-21页 |
| ·胞内抗体与人艾滋病基因治疗 | 第21-22页 |
| ·胞内抗体作为研究分子功能的工具 | 第22-23页 |
| ·展望 | 第23-24页 |
| 4. 基因工程抗体技术 | 第24-25页 |
| ·抗体基因的克隆 | 第24页 |
| ·抗体基因组合文库技术 | 第24-25页 |
| ·核糖体展示技术(ribosome display，RD) | 第25页 |
| 5. 基因工程抗体宿主表达系统 | 第25-27页 |
| ·细菌(大肠埃希氏菌)表达系统 | 第25-26页 |
| ·酵母表达系统 | 第26页 |
| ·哺乳动物细胞表达系统 | 第26-27页 |
| ·植物表达系统 | 第27页 |
| 6. 基因工程抗体的应用 | 第27-30页 |
| ·在肿瘤诊疗中的作用 | 第27-28页 |
| ·血液病 | 第28-29页 |
| ·抗病毒感染 | 第29页 |
| ·自身免疫性疾病 | 第29-30页 |
| ·器官移植 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-35页 |
| 第二篇 论文实验部分 抗肺癌单链抗体的构建、表达、纯化及初步活性鉴定 | 第35-63页 |
| 前言 | 第36-38页 |
| 1. 实验材料和仪器 | 第38-43页 |
| ·菌种和细胞株 | 第38页 |
| ·质粒 | 第38页 |
| ·酶 | 第38页 |
| ·各种试剂盒 | 第38-39页 |
| ·分子量标准 | 第39页 |
| ·缓冲液及其他溶液 | 第39-40页 |
| ·培养液和固体培养基 | 第40-41页 |
| ·其它主要试剂和商品来源 | 第41-42页 |
| ·各种电泳胶的制备 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42-43页 |
| 2. 实验方法与步骤 | 第43-48页 |
| ·PCR扩增抗体的重链和轻链 | 第43页 |
| ·片段纯化 | 第43-44页 |
| ·连接 | 第44页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·转化细胞 | 第44页 |
| ·蓝白斑筛选和 PCR筛选 | 第44-45页 |
| ·质粒抽提和酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重叠延伸 PCR构建单链抗体 | 第45页 |
| ·T-ScFv’的构建 | 第45页 |
| ·ScFv基因的改造 | 第45-46页 |
| ·pET22-ScFv基因的构建 | 第46页 |
| ·pET22-ScFv基因的诱导表达 | 第46页 |
| ·包涵体的提取和纯化 | 第46-47页 |
| ·pET22-ScFv蛋白的亲和层析 | 第47页 |
| ·蛋白复性 | 第47页 |
| ·蛋白活力测定 | 第47-48页 |
| 3. 实验结果分析 | 第48-57页 |
| ·抗体重链和轻链可变区的克隆 | 第48-49页 |
| ·重链和轻链的序列测定 | 第49-50页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第50-53页 |
| ·pET22-ScFv的构建 | 第53页 |
| ·pET22-ScFv基因在大肠杆菌 BL21中的表达 | 第53-54页 |
| ·包涵体的提取及纯化 | 第54-56页 |
| ·蛋白活力测定 | 第56-57页 |
| 4. 讨论 | 第57-60页 |
| ·单链抗体基因的构建 | 第57-58页 |
| ·表达载体的构建以及在大肠杆菌中的表达 | 第58-59页 |
| ·包涵体的复性 | 第59-60页 |
| 5. 结论与展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-63页 |
| 附录1:pET-22b(+)质粒图谱 | 第63-64页 |
| 附录2:英文缩写词表 | 第64-65页 |
| 附录3:碱提取质粒方法 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
