| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| ·蓝舌病概述 | 第13-23页 |
| ·病原学特点 | 第13-14页 |
| ·基因组结构与特征 | 第14-15页 |
| ·BTV 基因组编码蛋白的生物学功能与特性 | 第15-19页 |
| ·BTV 生活周期 | 第19页 |
| ·BTV 流行病学特点 | 第19-20页 |
| ·BTV 发病机理、临床症状和病理变化 | 第20-21页 |
| ·BT 的预防 | 第21-23页 |
| ·BT 的诊断 | 第23页 |
| ·BTVVP2 抗原表位研究进展 | 第23-24页 |
| ·研究目的与意义 | 第24-25页 |
| 第二章 BTV8 VP2 蛋白的原核表达和抗原性检测 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·表达载体、感受态细胞 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-28页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·BTV8 病毒 RNA 的提取及反转录 | 第25-26页 |
| ·BTV8 L2 基因的扩增、鉴定 | 第26页 |
| ·VP2 蛋白原核表达载体的构建 | 第26-28页 |
| ·VP2 蛋白的原核表达以及 SDS-PAGE 分析 | 第28页 |
| ·原核表达重组 VP2 蛋白的切胶纯化 | 第28页 |
| ·Western Blot 检测原核表达重组 VP2 蛋白 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-30页 |
| ·L2 基因的 PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·重组质粒 pC4X-VP2 的双酶切鉴定 | 第29页 |
| ·VP2 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析 | 第29-30页 |
| ·表达产物的 Western Blot 分析 | 第30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 BTV8 VP2 蛋白的真核表达和抗原性检测 | 第32-39页 |
| ·材料 | 第32页 |
| ·质粒、细胞 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第32页 |
| ·方法 | 第32-36页 |
| ·引物设计 | 第32页 |
| ·L2 基因的扩增及鉴定 | 第32-33页 |
| ·L2 基因重组供体质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·L2 基因重组杆粒的制备、提取与鉴定 | 第34-35页 |
| ·昆虫细胞 Sf9 中重组杆状病毒的产生 | 第35页 |
| ·重组杆状病毒 BACV-VP2 在 Sf9 昆虫细胞中的表达以及 SDS-PAGE 分析 | 第35页 |
| ·真核表达重组 VP2 蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| ·Western Blot 检测真核表达重组 VP2 蛋白 | 第36页 |
| ·结果 | 第36-38页 |
| ·L2 基因的 PCR 扩增 | 第36页 |
| ·重组供体质粒 pFast-VP2 的鉴定 | 第36页 |
| ·重组杆粒 BAC-VP2 的鉴定 | 第36-37页 |
| ·昆虫细胞 Sf9 中重组杆状病毒的产生 | 第37页 |
| ·真核表达 VP2 蛋白的 SDS-PAGE 电泳分析及纯化 | 第37-38页 |
| ·表达产物的 Western Blot 分析 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 BTV8 VP2 蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 | 第39-47页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·细胞和病毒 | 第39页 |
| ·实验动物 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要溶液和培养基的配制 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·动物免疫 | 第39页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第39-40页 |
| ·细胞融合 | 第40-41页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第41页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆、冻存和复苏 | 第41-42页 |
| ·Mab 腹水的制备 | 第42页 |
| ·Mab 的鉴定 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-45页 |
| ·间接 ELISA 检测方法的建立 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞株的获得 | 第43-44页 |
| ·Mab 亚类鉴定 | 第44页 |
| ·Mab 的 Western Blot 鉴定 | 第44页 |
| ·IFA 鉴定 | 第44-45页 |
| ·腹水效价及杂交瘤细胞株抗体分泌稳定性的测定 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第五章 BTV8 VP2 蛋白抗原表位的鉴定 | 第47-56页 |
| ·材料 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-49页 |
| ·BTV8 VP2 蛋白的分段截短表达 | 第47页 |
| ·3E11 和 4D9 抗原表位的初步鉴定 | 第47页 |
| ·3E11 和 4D9 抗原表位的进一步鉴定 | 第47-48页 |
| ·3E11 和 4D9 抗原表位保守性分析 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-54页 |
| ·重组质粒 pMAL-VP2-1﹣pMAL-VP2-24 的 PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·抗原表位的初步鉴定及精确定位 | 第49-52页 |
| ·3E11 和 4D9 抗原表位保守性分析 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
