| 中文摘要 | 第1-13页 |
| 英文摘要 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-31页 |
| 一、白细胞介素-18 研究进展 | 第16-29页 |
| ·IL-18 基因结构及其表达的调节 | 第16-17页 |
| ·IL-18 的合成与表达 | 第17-18页 |
| ·IL-18 的受体与信号转导 | 第18-21页 |
| ·IL-18 的生物学功能 | 第21-22页 |
| ·IL-18 的自然拮抗 | 第22页 |
| ·IL-18 与机体防御 | 第22-29页 |
| ·抗细菌感染 | 第22-23页 |
| ·抗病毒感染 | 第23-24页 |
| ·抗真菌性感染 | 第24页 |
| ·抗原虫和寄生虫感染 | 第24-26页 |
| ·在自动免疫和炎症疾病中的作用 | 第26-27页 |
| ·IL-18 的抗肿瘤作用 | 第27-29页 |
| ·IL-18 的检测 | 第29页 |
| 二、动物白细胞介素-18 研究进展 | 第29-30页 |
| ·猪 | 第29页 |
| ·马 | 第29页 |
| ·牛 | 第29-30页 |
| ·羊 | 第30页 |
| ·犬 | 第30页 |
| ·猫 | 第30页 |
| ·禽 | 第30页 |
| 三、牛羊 IL-18 研究的意义 | 第30-31页 |
| 第一章 山羊白细胞介素-18 基因克隆及其mRNA 在体内表达情况的研究 | 第31-45页 |
| 1 材料与方法 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·载体与受体菌 | 第31-32页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第32页 |
| ·主要溶液配制 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-38页 |
| ·细胞 | 第33页 |
| ·组织 | 第33页 |
| ·IL-18 cDNA 基因的RT-PCR 扩增 | 第33-35页 |
| ·PCR 产物的纯化和克隆 | 第35-37页 |
| ·gIL-18 基因的序列分析 | 第37-38页 |
| ·半定量RT-PCR 测定 IL-18mRNA 在各组织中的表达水平 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-43页 |
| ·山羊IL-18 基因的 RT-PCR 扩增 | 第38-39页 |
| ·gIL-18 cDNA 克隆片段的序列测定 | 第39页 |
| ·IL-18mRNA 在各组织中的表达 | 第39-43页 |
| 3 讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 山羊IL-18 成熟蛋白基因的原核表达 | 第45-60页 |
| 1 材料与方法 | 第45-54页 |
| ·载体与受体菌 | 第45页 |
| ·有关试剂 | 第45页 |
| ·有关仪器 | 第45-46页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)试剂 | 第46-47页 |
| ·免疫转印有关试剂和材料 | 第47页 |
| ·gIL-18 成熟蛋白基因原核表达载体的构建 | 第47-51页 |
| ·重组质粒pET-gIL-18 的构建 | 第47-48页 |
| ·重组质粒的提取与初步筛选 | 第48-51页 |
| ·pET-gIL-18 重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第51页 |
| ·重组表达质粒重新转化受体菌 | 第51页 |
| ·gIL-18 融合蛋白的诱导表达 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE 样品的制备 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE | 第51-52页 |
| ·装板 | 第51页 |
| ·12%分离胶 | 第51-52页 |
| ·5%浓缩胶 | 第52页 |
| ·上样电泳 | 第52页 |
| ·重组菌表达产物多克隆抗血清的制备 | 第52-53页 |
| ·重组菌表达产物的回收 | 第52页 |
| ·免疫小鼠 | 第52-53页 |
| ·重组菌菌体裂解物的免疫印迹(Western-blot)分析 | 第53页 |
| ·重组融合蛋白的变性、复性和纯化 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的活性测定 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-58页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第54页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第54-55页 |
| ·融合蛋白的纯化 | 第55页 |
| ·Western-Blotting 结果 | 第55页 |
| ·重组蛋白的活性测定 | 第55-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第三章 来源于羊痘病毒的 IL-18 结合蛋白基因的表达和初步活性分析 | 第60-68页 |
| 1 材料与方法 | 第60-64页 |
| ·病毒和鸡胚 | 第60-61页 |
| ·试剂 | 第61页 |
| ·gIL-18BP 基因的克隆和序列测定 | 第61-63页 |
| ·引物 | 第61页 |
| ·DNA 模板的提取 | 第61-62页 |
| ·PCR | 第62页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第62-63页 |
| ·山羊 IL-18BP 基因的原核表达 | 第63页 |
| ·表达产物的纯化 | 第63页 |
| ·抗山羊 IL-18 活性初步检测 | 第63-64页 |
| 2 结果 | 第64-66页 |
| ·IL-18BP 基因的克隆和序列测定 | 第64页 |
| ·重组 IL-18BP 的表达和纯化 | 第64页 |
| ·重组蛋白抗山羊 IL-18 活性测定 | 第64-66页 |
| 3 讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 奶牛白细胞介素-18 成熟蛋白基因的克隆和原核表达 | 第68-75页 |
| 1 材料与方法 | 第68-71页 |
| ·质粒和受体菌 | 第68页 |
| ·细胞 | 第68-69页 |
| ·总 RNA 的提取 | 第69页 |
| ·bIL-18 基因的 RT-PCR 扩增 | 第69-70页 |
| ·bIl-18 基因的克隆 | 第70-71页 |
| ·bIL-18 基因的原核表达 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-73页 |
| ·bIL-18 基因的 RT-PCR 扩增 | 第71页 |
| ·重组bIL-18 的表达 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-75页 |
| 结论 | 第75-76页 |
| 创新之处 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简介 | 第91页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第91-94页 |
