| 中文摘要 | 第1-11页 |
| 英文摘要 | 第11-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-50页 |
| 1 耐盐遗传基础问题 | 第15-19页 |
| ·耐盐性遗传的早期研究 | 第15页 |
| ·耐盐性遗传分析 | 第15-19页 |
| ·分子标记(molecular marker)的应用 | 第16-17页 |
| ·用转基因的方法研究植物耐盐性 | 第17-19页 |
| ·过量表达(overexpression)某些基因研究植物耐盐性 | 第17-18页 |
| ·基因沉默(gene silencing) | 第18-19页 |
| 2 植物耐盐机制 | 第19-37页 |
| ·植物对盐胁迫的反应及适应 | 第19-22页 |
| ·植物对盐胁迫的反应 | 第19-21页 |
| ·盐胁迫影响植物形态发育 | 第19-20页 |
| ·盐胁迫影响植物的生理生化代谢 | 第20-21页 |
| ·植物对盐胁迫的适应 | 第21-22页 |
| ·泌盐 | 第21页 |
| ·稀盐 | 第21-22页 |
| ·拒盐 | 第22页 |
| ·离子均衡及其调控 | 第22-34页 |
| ·跨膜质子电化学梯度的重建 | 第23-27页 |
| ·质膜H~+-ATPase | 第23页 |
| ·液泡膜H~+-ATPase | 第23-24页 |
| ·液泡膜H~+-PPase | 第24-26页 |
| ·液泡膜H~+-ATPase 和H~+-PPase 的关系 | 第26-27页 |
| ·Na~+、K~+ 的稳态 | 第27-31页 |
| ·Na~+ 跨膜内流与K~+ 吸收 | 第27-28页 |
| ·Na~+ 的外排 | 第28-29页 |
| ·Na~+ 的区隔化 | 第29-30页 |
| ·K~+ 的稳态 | 第30-31页 |
| ·Cl~-的吸收和区隔化 | 第31页 |
| ·Ca~(2+) 的均衡 | 第31-32页 |
| ·SOS 信号通路与离子稳态的调节 | 第32-34页 |
| ·渗透平衡的重建及调节途径 | 第34-37页 |
| ·渗透调节物质的合成及渗透平衡 | 第34-35页 |
| ·与渗透平衡有关的调节途径 | 第35-37页 |
| ·ABA 与渗透平衡调节 | 第35-36页 |
| ·蛋白激酶途径 | 第36-37页 |
| ·磷脂酶途径 | 第37页 |
| 3. 植物cDNA 文库构建与目的基因克隆 | 第37-40页 |
| ·基因文库的分类 | 第38页 |
| ·植物cDNA 文库构建的基本过程 | 第38页 |
| ·EST 的概念与技术原理 | 第38-40页 |
| ·EST 的概念 | 第38-39页 |
| ·EST 的技术原理 | 第39页 |
| ·EST 的应用 | 第39-40页 |
| ·构建遗传学图谱与基因定位 | 第39-40页 |
| ·分离与鉴定新基因 | 第40页 |
| ·基因表达谱的研究 | 第40页 |
| ·功能基因学和比较功能组学的研究 | 第40页 |
| ·EST 在林木研究中的应用 | 第40页 |
| 4. 杨树抗性基因工程研究进展 | 第40-50页 |
| ·林木基因转化技术 | 第41-42页 |
| ·农杆菌介导法 | 第41-42页 |
| ·DNA 直接导入法 | 第42页 |
| ·杨树转基因研究应用 | 第42-49页 |
| ·抗虫转基因研究 | 第42-45页 |
| ·抗病转基因研究 | 第45页 |
| ·抗除草剂转基因研究 | 第45-46页 |
| ·抗盐和抗渗透胁迫转基因研究 | 第46-47页 |
| ·材性改良和木质素基因转化研究 | 第47-48页 |
| ·杨树其他基因的转化研究 | 第48-49页 |
| ·杨树基因转化研究中存在的问题 | 第49-50页 |
| 第二部分 实验论文 | 第50-99页 |
| 第一章 补血草(Limonium sinense)EST 数据库的构建 | 第51-67页 |
| 1 实验材料 | 第51-53页 |
| 2 实验方法与步骤 | 第53-57页 |
| ·补血草总RNA 的提取 | 第53-54页 |
| ·Poly(A+) RNA 分离 | 第54页 |
| ·cDNA 库构建 | 第54-55页 |
| ·cDNA 第一链的合成 | 第54页 |
| ·cDNA 第二链的合成 | 第54页 |
| ·双链cDNA 末端补平 | 第54-55页 |
| ·EcoRI 接头的加接 | 第55页 |
| ·双链cDNA 末端的磷酸化和XhoI 酶切 | 第55页 |
| ·胶回收目的片断 | 第55页 |
| ·连接和转化 | 第55页 |
| ·菌落PCR 检测 | 第55-56页 |
| ·文库产品 | 第56页 |
| ·质粒DNA 测序 | 第56页 |
| ·序列编辑和BLAST 分析 | 第56-57页 |
| ·GeneTool 分析 | 第56页 |
| ·BLAST 分析 | 第56-57页 |
| ·DNA alignment 分析 | 第57页 |
| 3 实验结果与分析 | 第57-65页 |
| ·测序结果和BLAST 分析结果 | 第57-64页 |
| ·耐胁迫基因ESTs | 第64页 |
| ·Digital Northern 分析和DNA alignment 分析结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 第二章 盐地碱蓬(Suaeda salsa)液泡膜焦磷酸酶基因的克隆与鉴定 | 第67-86页 |
| 1 实验材料 | 第67-68页 |
| 2. 实验方法 | 第68-75页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第68页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第68-69页 |
| ·质粒DNA 测序 | 第69页 |
| ·Gene Clean 法回收目的cDNA 片段 | 第69页 |
| ·农杆菌感受态的制备及转化 | 第69-70页 |
| ·植物基因组DNA 的提取 | 第70页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第70-71页 |
| ·杂交膜的制备 | 第70页 |
| ·探针的制备 | 第70-71页 |
| ·杂交过程 | 第71页 |
| ·异硫氰酸胍法提取植物的总RNA | 第71-72页 |
| ·Northern 杂交分析 | 第72页 |
| ·在含有甲醛的凝胶上进行RNA 电泳 | 第72页 |
| ·RNA 杂交膜的制备 | 第72页 |
| ·杂交过程 | 第72页 |
| ·液泡膜H~+ -ATPase、H~+ -PPase 水解活性的测定 | 第72-73页 |
| ·液泡膜微囊的制备 | 第72-73页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第73页 |
| ·V -ATPase 和V-PPase 水解活性的测定 | 第73页 |
| ·Western blot 分析 | 第73-74页 |
| ·SsVP 植物表达载体的构建及农杆菌的转化 | 第74页 |
| ·SsVP 植物表达载体的构建 | 第74页 |
| ·农杆菌的转化 | 第74页 |
| ·拟南芥的培养及转化 | 第74-75页 |
| ·植物的生长 | 第74页 |
| ·菌液的准备 | 第74页 |
| ·渗透转化 | 第74-75页 |
| ·转化子的筛选 | 第75页 |
| ·转基因植株的检测 | 第75页 |
| ·转化子的遗传分析 | 第75页 |
| ·转基因植株的PCR 检测 | 第75页 |
| ·转基因植株的Northern 杂交鉴定 | 第75页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第75-84页 |
| ·盐地碱蓬SsVP cDNA 克隆的分离和鉴定 | 第76-78页 |
| ·SsVP 的基因组Southern 杂交分析 | 第78-79页 |
| ·SsVP 基因在盐和干旱处理下的特异性表达 | 第79页 |
| ·SsVP 基因在拟南芥中的过量表达 | 第79-84页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第79-80页 |
| ·转SsVP 基因拟南芥的筛选 | 第80-81页 |
| ·NaCl 和干旱胁迫对转SsVP 基因拟南芥V-ATPase、V-PPase 活性的影响 | 第81页 |
| ·过量表达SsVP 明显提高了转基因拟南芥植株的耐盐性 | 第81页 |
| ·过量表达SsVP 提高了转基因拟南芥植株的干旱抗性 | 第81-84页 |
| 4. 讨论 | 第84-86页 |
| 第三章 盐地碱蓬SsNHX1 基因导入杨树的研究 | 第86-99页 |
| 1 实验材料 | 第86-87页 |
| 2 实验方法 | 第87-92页 |
| ·基本分子生物学实验技术 | 第87-89页 |
| ·改良CTAB 法微量提取杨树DNA | 第87-88页 |
| ·Trizol 法提取RNA | 第88页 |
| ·转基因杨树的分子检测 | 第88页 |
| ·转基因杨树的PCR 检测 | 第88页 |
| ·转基因杨树的RT-PCR 检测 | 第88-89页 |
| ·SsNHX1 基因的获得 | 第89页 |
| ·植物表达载体pROKII-SsNHX1 的构建 | 第89页 |
| ·植物表达载体的农杆菌转化 | 第89页 |
| ·菌种的保存 | 第89页 |
| ·建立杨树的遗传转化体系 | 第89-90页 |
| ·外植体冲洗与消毒 | 第89-90页 |
| ·预培养 | 第90页 |
| ·农杆菌转化方法 | 第90页 |
| ·转基因杨树的处理 | 第90页 |
| ·对照与转基因杨树叶片干重、鲜重的测定 | 第90-91页 |
| ·对照与转基因杨树Na~+、K~+离子含量的测定 | 第91页 |
| ·对照与转基因杨树MDA 含量的测定 | 第91页 |
| ·对照与转基因杨树光合水平的测定 | 第91页 |
| ·对照与转基因杨树脯氨酸含量的测定 | 第91页 |
| ·细胞膜透性的测定 | 第91-92页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第92-97页 |
| ·杨树的遗传转化及转基因杨树的分子检测 | 第92-93页 |
| ·杨树转化 | 第92页 |
| ·转基因杨树的RT-PCR 检测 | 第92页 |
| ·转基因杨树的Northern 杂交 | 第92-93页 |
| ·转基因杨树的耐盐性分析 | 第93-97页 |
| ·NaCl 对转SsNHX1 基因杨树生长的影响 | 第93页 |
| ·盐处理对转基因杨树与野生型杨树相对含水量的影响 | 第93-94页 |
| ·转基因杨树与野生型植株中Na~+、K~+ 含量及K~+/Na~+ 比的变化情况 | 第94页 |
| ·盐处理对转基因杨树与野生型杨树叶片光合的影响 | 第94-95页 |
| ·盐处理对转基因杨树与野生型杨树中丙二醛(MDA)的影响 | 第95-96页 |
| ·NaCl 处理对转基因杨树细胞膜透性的影响 | 第96-97页 |
| ·转基因杨树与野生型对照组织中脯氨酸含量的变化 | 第97页 |
| 4 讨论 | 第97-99页 |
| 参考文献 | 第99-115页 |
| 附录 | 第115-118页 |
| 缩写词 | 第118-120页 |
| 攻读博士学位期间的学术论文、获奖成果、著作及参与的科研课题 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 图版 | 第122页 |
