| 第一章 引言 | 第1-21页 |
| 1 Apx毒素 | 第9-16页 |
| ·Apx毒素的分子结构 | 第9-13页 |
| ·Apx毒素的致病机制 | 第13-14页 |
| ·Apx毒素的免疫原性 | 第14-15页 |
| ·Apx毒素的研究意义 | 第15-16页 |
| 2 APP的分子致弱 | 第16-21页 |
| ·穿梭载体 | 第17-18页 |
| ·自杀载体 | 第18-19页 |
| ·APP突变体的研究进展 | 第19页 |
| ·本研究的主要内容和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 Apx Ⅱ毒素的结构与功能分析 | 第21-58页 |
| 1 材料和方法 | 第21-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·试剂及仪器 | 第22页 |
| ·APP基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| ·Apx Ⅱ A的原核表达载体的构建 | 第23-24页 |
| ·Apx Ⅱ A的原核表达 | 第24页 |
| ·rApx Ⅱ A包涵体的制备、洗涤和溶解 | 第24页 |
| ·rApx Ⅱ A的复性和纯化 | 第24-25页 |
| ·rApx Ⅱ A与Apx Ⅱ C的共表达 | 第25-26页 |
| ·活化及未活化rApx Ⅱ A的溶血实验 | 第26页 |
| ·GST的表达和纯化 | 第26页 |
| ·Apx Ⅱ毒素的动物实验 | 第26-27页 |
| 2 结果 | 第27-49页 |
| ·Apx Ⅱ A的分子结构 | 第27-40页 |
| ·Apx Ⅱ A基因的扩增与原核表达载体pGEX-Apx Ⅱ A的构建 | 第40-41页 |
| ·Apx Ⅱ A的原核表达以及rApx Ⅱ A的复性和纯化 | 第41-42页 |
| ·Apx Ⅱ C原核表达载体的构建 | 第42-43页 |
| ·rApx Ⅱ A的活化及其复性和纯化 | 第43页 |
| ·活化及未活化rApx Ⅱ A的溶血实验 | 第43-44页 |
| ·rGST的表达和纯化 | 第44页 |
| ·rApx Ⅱ A的免疫原性 | 第44-45页 |
| ·rApx Ⅱ A蛋白的动物实验 | 第45-49页 |
| 3 讨论 | 第49-58页 |
| ·rApx Ⅱ A的表达及其复性的影响因素 | 第49-52页 |
| ·Apx Ⅱ C介导的酰基化对Apx Ⅱ A毒素溶血活性的影响 | 第52-54页 |
| ·GST融合标签对rApx Ⅱ A溶血活性的影响及其意义 | 第54-56页 |
| ·rApx Ⅱ A的免疫原性和交叉保护能力 | 第56-58页 |
| 第三章 APP的分子致弱 | 第58-83页 |
| 1 材料和方法 | 第58-67页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·试剂及仪器 | 第58-59页 |
| ·APP基因组DNA的提取 | 第59页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ △CAmp转移重组质粒的构建 | 第59-61页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ △CAmp转移重组质粒的大量制备及纯化 | 第61-62页 |
| ·APP电转化感受态细胞的制备 | 第62页 |
| ·电转化 | 第62-65页 |
| ·Apx Ⅱ C基因缺失突变株的筛选 | 第65-67页 |
| 2 结果 | 第67-72页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ CA重组质粒的构建 | 第67页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ △CA重组质粒的构建 | 第67-68页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ △CAmp转移重组质粒的构建 | 第68-69页 |
| ·APP-E.coli穿梭载体pGZRS-18的预转化 | 第69-71页 |
| ·pMD-Apx Ⅱ △CAmp的电转化以及Apx Ⅱ C基因缺失突变株的筛选 | 第71-72页 |
| 3 讨论 | 第72-83页 |
| ·为什么要插入Amp~r基因作为选择标记 | 第72页 |
| ·影响同源重组效率的因素 | 第72-74页 |
| ·影响电转化效率的因素 | 第74-79页 |
| ·没有筛选到突变株的可能原因 | 第79-81页 |
| ·今后解决办法 | 第81-83页 |
| 第四章 结论 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 作者简历 | 第93-94页 |
| 附图 | 第94-96页 |
