| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-26页 |
| ·3-羟基丙酸概况 | 第16-20页 |
| ·3-羟基丙酸的理化性质及用途 | 第16-17页 |
| ·3-羟基丙酸的合成方法 | 第17页 |
| ·生物法生产 3-羟基丙酸的途径 | 第17-19页 |
| ·生产菌株 | 第19-20页 |
| ·全局转录调控机器工程 | 第20-22页 |
| ·原理 | 第20-21页 |
| ·全局转录调控在改进细胞表型中的应用和优势 | 第21-22页 |
| ·同源重组技术与 RecA 重组系统 | 第22-24页 |
| ·同源重组技术 | 第22-23页 |
| ·RecA 重组系统 | 第23-24页 |
| ·插入序列 | 第24-25页 |
| ·本课题的研究意义 | 第25-26页 |
| 第二章 全局转录调控法生产 3-羟基丙酸的研究 | 第26-42页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·实验材料 | 第26-27页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·试剂与仪器 | 第26-27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·K.pneumoniae 基因组总 DNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增 K.pneumoniae 的首要σ因子基因 rpoD | 第28页 |
| ·构建含有未突变基因 rpoD 的表达载体 pET-PK-wrpoD | 第28-29页 |
| ·阳性克隆 E.coli(pET-PK-wrpoD)的鉴定 | 第29-30页 |
| ·对照菌 K.p(pET-PK-wrpoD)的构建 | 第30-31页 |
| ·易错 PCR 扩增基因 rpoD | 第31页 |
| ·构建基因 rpoD 突变库 | 第31-32页 |
| ·工程菌 K.p(pET-PK-mrpoD)的鉴定 | 第32页 |
| ·工程菌 K.p(pET-PK-mrpoD)的发酵 | 第32-33页 |
| ·生长曲线的绘制和底物甘油消耗的测定 | 第33页 |
| ·高效液相色谱（HPLC）检测发酵液中产物 3-HP 的产量 | 第33页 |
| ·高产工程菌突变基因 rpoD 的测序鉴定 | 第33-34页 |
| ·结果与讨论 | 第34-40页 |
| ·K.pneumoniae 基因组总 DNA 的提取 | 第34页 |
| ·PCR 扩增 K.pneumoniae 的首要σ因子基因 rpoD | 第34-35页 |
| ·阳性克隆 E.coli（pET-PK-wrpoD）的鉴定 | 第35-36页 |
| ·对照菌 K.p(pET-PK-wrpoD)的构建 | 第36页 |
| ·易错 PCR 扩增基因 rpoD 的最优条件和突变库的构建 | 第36-37页 |
| ·重组菌 K.p(pET-PK-mrpoD)阳性克隆的筛选 | 第37-38页 |
| ·重组菌 K.p(pET-PK-mrpoD)发酵生产 3-HP | 第38-40页 |
| ·突变 rpoD 基因的序列分析 | 第40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第三章 E.coli 醛脱氢酶（aldH）的克隆与表达 | 第42-54页 |
| ·引言 | 第42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第42页 |
| ·试剂与仪器 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·E.coli 基因组总 DNA 的提取 | 第43页 |
| ·E.coli 醛脱氢酶基因 aldH 的克隆 | 第43-44页 |
| ·构建表达载体 pET-PK-aldH | 第44-45页 |
| ·阳性克隆 E.coli(pET-PK-aldH)的鉴定 | 第45页 |
| ·工程菌 K.p(pET-PK-aldH)的构建 | 第45页 |
| ·醛脱氢酶基因 aldH 在 K.pneumoniae 中的表达 | 第45-46页 |
| ·重组菌 K.p(pET-PK- aldH)发酵生产 3-HP | 第46页 |
| ·生长曲线的绘制和底物甘油消耗的测定 | 第46页 |
| ·HPLC 检测发酵液中产物 3-HP 的产量 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-52页 |
| ·E.coli 基因组总 DNA 的提取 | 第46-47页 |
| ·PCR 扩增 E.coli 的醛脱氢酶基因 aldH | 第47页 |
| ·表达载体 pET-PK-aldH 的鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组菌 K.p(pET-PK-aldH)的构建 | 第48-49页 |
| ·醛脱氢酶基因 aldH 在 K.pneumoniae 中的表达 | 第49-50页 |
| ·重组菌 K.p(pET-PK-aldH)发酵生产 3-HP | 第50-52页 |
| ·本章小结 | 第52-54页 |
| 第四章 同源重组策略生产 3-羟基丙酸的研究 | 第54-70页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第54页 |
| ·试剂与仪器 | 第54页 |
| ·培养基 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-61页 |
| ·同源重组片段的设计 | 第55页 |
| ·AD 各组成部分的克隆 | 第55-57页 |
| ·overlap PCR 克隆片段 AB、CD | 第57-58页 |
| ·重组质粒 pET-AB 的构建 | 第58-59页 |
| ·重组质粒 pET-AD 的构建 | 第59-60页 |
| ·同源重组构建重组菌 KpAD | 第60页 |
| ·重组菌 KpAD 的蛋白表达 | 第60-61页 |
| ·重组菌 KpAD 发酵生产 3-HP | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-69页 |
| ·PCR 扩增 AD 各组成部分 | 第61-62页 |
| ·overlap PCR 扩增 AB、CD | 第62页 |
| ·重组质粒 pET-AB 的鉴定 | 第62-63页 |
| ·重组质粒 pET-AD 的鉴定 | 第63-64页 |
| ·PCR 扩增同源重组片段 AD | 第64-65页 |
| ·重组菌 KpAD 的鉴定 | 第65-66页 |
| ·重组菌 KpAD 的蛋白表达 | 第66-67页 |
| ·重组菌 KpAD 发酵生产 3-HP | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-70页 |
| 第五章 总结与建议 | 第70-74页 |
| ·结论 | 第70-71页 |
| ·创新点 | 第71页 |
| ·问题与建议 | 第71-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录 1 试剂 | 第80-82页 |
| 附录 2 仪器 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第84-85页 |
| 作者和导师简介 | 第85-86页 |
| 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第86-87页 |
