| 1 前言 转基因鱼的研究进展 | 第1-16页 |
| ·基因转移的方法 | 第6-9页 |
| ·显微注射法 | 第6-7页 |
| ·电穿孔法 | 第7-8页 |
| ·精子携带法 | 第8页 |
| ·基因打靶技术 | 第8页 |
| ·其他方法 | 第8-9页 |
| ·外源基因的构建 | 第9-11页 |
| ·编码序列 | 第9-11页 |
| ·调控序列 | 第11页 |
| ·转基因鱼的应用 | 第11-13页 |
| ·鱼类的基因工程育种 | 第11-12页 |
| ·功能基因和调控序列的鉴定 | 第12-13页 |
| ·转基因观赏鱼类 | 第13页 |
| ·转基因鱼研究存在的问题 | 第13-16页 |
| ·外源基因在胚胎中的整合和表达 | 第13-14页 |
| ·转基因鱼的安全性 | 第14-16页 |
| 2 Nramp基因显微注射表达载体构建 | 第16-28页 |
| ·实验材料 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·从真鲷cDNA中PCR克隆Nramp1700bp片段 | 第17-19页 |
| ·EcoR Ⅰ+Sal Ⅰ酶消化 | 第19页 |
| ·3900bp质粒骨架制备 | 第19-20页 |
| ·连接反应 | 第20页 |
| ·转化 | 第20-21页 |
| ·小量制备质粒 | 第21-22页 |
| ·酶切检测连接是否成功 | 第22-23页 |
| ·PCR检测是否正确 | 第23页 |
| ·实验结果 | 第23-28页 |
| ·Nramp 1700bp片段的PCR克隆 | 第23页 |
| ·pCMVGFP质粒的EcoR Ⅰ+Sal Ⅰ双酶切 | 第23-25页 |
| ·pCMVGFP 3900bp片段和Nramp 1700bp片段回收定量 | 第25页 |
| ·连接反应和转化 | 第25页 |
| ·质粒正确性检测 | 第25-28页 |
| 3 外源基因向花鲈和斑马鱼受精卵的转移 | 第28-44页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-34页 |
| ·质粒大量制备 | 第29-30页 |
| ·质粒大量酶切线性化 | 第30页 |
| ·显微注射DNA溶液的配置 | 第30-31页 |
| ·显微注射仪准备 | 第31页 |
| ·显微注射 | 第31页 |
| ·胚胎培养 | 第31-32页 |
| ·检测整合和表达的方法 | 第32-34页 |
| ·实验结果 | 第34-44页 |
| ·质粒提取 | 第34页 |
| ·酶切线性化及定量 | 第34-36页 |
| ·注射胚胎的存活率 | 第36页 |
| ·绿色荧光蛋白的表达检测 | 第36-40页 |
| ·PCR检测外源DNA的整合 | 第40-44页 |
| 4 讨论 | 第44-47页 |
| ·外源基因的构建和导入 | 第44页 |
| ·显微注射下的胚胎的存活状况 | 第44-45页 |
| ·外源基因导入受精卵后的整合和表达 | 第45-46页 |
| ·转基因鱼的检测方法 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
