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人类羰基还原酶基因CBR1和DCXR的克隆及其编码蛋白的功能研究

中文摘要第1-6页
英文摘要第6-8页
前言第8-10页
一 材料和试剂第10-15页
 1 菌株、质粒、细胞株、实验动物第10-11页
 2 实验耗材和试剂第11-13页
 3 常用试剂配制第13-15页
 4 引物第15页
二 主要的仪器设备第15-16页
三 生物学信息途径和计算机分析软件包第16-17页
四 技术路线和实验方法第17-29页
 1 设计思路和实验流程第17页
 2 CBR1和DCXR基因的克隆第17-20页
 3 Northern杂交第20-21页
 4 RT—PCR检测CBR1和DCXR在不同肝癌细胞株及人胎肝组织中的表达第21-22页
 5 重组蛋白的表达纯化、多克隆抗体的制备第22-24页
 6 Western blot和免疫组化分析第24-25页
 7 重组蛋白酶活性检测及对药物底物的筛查第25页
 8 稳定表达细胞株的构建第25-27页
 9 细胞增殖抑制实验(MTS实验)第27-28页
 10 流式细胞仪检测细胞凋亡及周期第28-29页
五 结果第29-60页
 1 人类CBR1和DCXR基因的克隆、鉴定以及生物信息学分析第29-37页
 2 CBR1和DCXR基因的组织表达谱及细胞表达谱第37-39页
 3 CBR1和DCXR重组蛋白的表达纯化和酶活性检测第39-43页
 4 重组蛋白对17种抗癌药物的氧化还原作用分析第43-47页
 5 重组蛋白多抗制备和ELISA检测第47-48页
 6 CBR1和DCXR在肝癌和癌旁组织中的表达分析第48-53页
 7 CBR1的表达对细胞耐药性的影响第53-54页
 8 CBR1的表达对EGCG诱导的细胞凋亡及周期阻滞的影响第54-57页
 9 DCXR的表达对细胞耐药性的影响第57-60页
六 讨论第60-63页
参考文献第63-67页
小结第67-68页
综述第68-81页
致谢第81-82页

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