中文摘要 | 第1-6页 |
英文摘要 | 第6-8页 |
前言 | 第8-10页 |
一 材料和试剂 | 第10-15页 |
1 菌株、质粒、细胞株、实验动物 | 第10-11页 |
2 实验耗材和试剂 | 第11-13页 |
3 常用试剂配制 | 第13-15页 |
4 引物 | 第15页 |
二 主要的仪器设备 | 第15-16页 |
三 生物学信息途径和计算机分析软件包 | 第16-17页 |
四 技术路线和实验方法 | 第17-29页 |
1 设计思路和实验流程 | 第17页 |
2 CBR1和DCXR基因的克隆 | 第17-20页 |
3 Northern杂交 | 第20-21页 |
4 RT—PCR检测CBR1和DCXR在不同肝癌细胞株及人胎肝组织中的表达 | 第21-22页 |
5 重组蛋白的表达纯化、多克隆抗体的制备 | 第22-24页 |
6 Western blot和免疫组化分析 | 第24-25页 |
7 重组蛋白酶活性检测及对药物底物的筛查 | 第25页 |
8 稳定表达细胞株的构建 | 第25-27页 |
9 细胞增殖抑制实验(MTS实验) | 第27-28页 |
10 流式细胞仪检测细胞凋亡及周期 | 第28-29页 |
五 结果 | 第29-60页 |
1 人类CBR1和DCXR基因的克隆、鉴定以及生物信息学分析 | 第29-37页 |
2 CBR1和DCXR基因的组织表达谱及细胞表达谱 | 第37-39页 |
3 CBR1和DCXR重组蛋白的表达纯化和酶活性检测 | 第39-43页 |
4 重组蛋白对17种抗癌药物的氧化还原作用分析 | 第43-47页 |
5 重组蛋白多抗制备和ELISA检测 | 第47-48页 |
6 CBR1和DCXR在肝癌和癌旁组织中的表达分析 | 第48-53页 |
7 CBR1的表达对细胞耐药性的影响 | 第53-54页 |
8 CBR1的表达对EGCG诱导的细胞凋亡及周期阻滞的影响 | 第54-57页 |
9 DCXR的表达对细胞耐药性的影响 | 第57-60页 |
六 讨论 | 第60-63页 |
参考文献 | 第63-67页 |
小结 | 第67-68页 |
综述 | 第68-81页 |
致谢 | 第81-82页 |