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转基因水稻中Bt蛋白ELISA检测方法的建立及检测

中文摘要第1-7页
英文摘要第7-8页
一、 前言第8-18页
 1.1 本研究的立题思想第8-9页
 1.2 文献综述第9-16页
  1.2.1 Bt的分类第9-11页
  1.2.2 Bt的结构与功能第11-12页
  1.2.3 转Bt基因植物发展概况第12-15页
  1.2.4 转Bt基因抗虫植物所存在的问题第15-16页
  1.2.5 水稻抗虫转基因研究现状第16页
 1.3 ELISA概述第16-18页
二、 材料与方法第18-24页
 2.1 实验材料第18页
 2.2 主要试剂第18页
 2.3 主要仪器第18-19页
 2.4 实验方法第19-24页
  2.4.1 抗原制备第19页
  2.4.2 兔的免疫第19页
  2.4.3 抗血清的制备第19页
  2.4.4 抗体的纯化第19-20页
  2.4.5 抗体的酶标记第20-21页
  2.4.6 样品可溶性蛋白提取第21页
  2.4.7 Bradford法测定样品中可溶性蛋白浓度第21-22页
  2.4.8 直接法测定转基因水稻中Bt含量的方法第22页
  2.4.9 间接法测定转基因水稻中Bt含量第22页
  2.4.10 双抗夹心法测转基因水稻中Bt含量第22-23页
  2.4.11 ELISA测定数据的处理第23-24页
三、 结果与分析第24-39页
 3.1 制备了高效价的CryIA(e)兔多抗第24页
 3.2 所制备的抗体分析第24-26页
  3.2.1 抗原抗体的免疫交叉反应第24-26页
  3.2.2 抗体的特异性第26页
 3.3 转基因水稻中Bt含量检测方法的确立第26-30页
  3.3.1 直接ELISA法第26-27页
  3.3.2 间接ELISA法第27-29页
  3.3.3 双抗夹心法ELISA第29-30页
 3.4 双抗夹心法ELISA条件的确立第30-34页
  3.4.1 包被方法的确立第30-31页
  3.4.2 可溶性蛋白提取方法的选择第31-33页
  3.4.3 酶标抗体的浓度选择第33页
  3.4.4 Bt包被量的确定第33-34页
  3.4.5 反应条件的确定第34页
 3.5 双抗夹心法ELISA的重复性分析第34-35页
  3.5.1 ELISA重复性分析第34页
  3.5.2 Bt含量检测重复性分析第34-35页
 3.6 应用双抗夹心法ELISA研究转基因水稻中Bt蛋白的表达第35-39页
  3.6.1 转基因水稻中Bt含量与其抗虫性的关系第35-36页
  3.6.2 转基因水稻中Bt含量的时空变化第36-39页
四、 讨论第39-43页
 4.1 抗体的有效性第39页
 4.2 检测方法的确立第39-40页
 4.3 检测中需注意的问题第40-41页
 4.4 转基因水稻中Bt含量与其抗虫性的关系第41页
 4.5 转基因水稻中Bt基因表达的时空变化第41页
 4.6 转基因水稻中Bt基因的沉默第41-42页
 4.7 将来可以继续进行的研究第42-43页
参考文献第43-46页
附录第46-56页
 1、 论文中所用Bt的氨基酸序列与DNA序列第46-50页
  1.1、 CryIA(e)第46-48页
   1.1.1 氨基酸序列第46页
   1.1.2 核苷酸序列第46-48页
  1.2、 CryIA(c)第48-50页
   1.2.1 氨基酸序列第48-49页
   1.2.2 核苷酸序列第49-50页
 2、 论文中所需溶液的配制方法第50页
 3、 IgG Purification Kit使用方法第50-51页
 4、 底物试剂盒使用方法第51页
 5、 转基因水稻中Bt含量与其抗虫性关系全部结果第51-56页
致谢第56页

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