缩略语表 | 第6-8页 |
中文摘要 | 第8-12页 |
Abstract | 第12-16页 |
前言 | 第17-19页 |
文献回顾 | 第19-35页 |
第一部分:Caveolin-1/3 与LRRC8A在心肌细胞膜上的分布及定位 | 第35-50页 |
1 材料 | 第35-39页 |
1.1 实验动物 | 第35页 |
1.2 实验主要试剂与药品 | 第35-36页 |
1.3 实验主要仪器 | 第36-37页 |
1.4 试剂配制 | 第37-39页 |
2 方法 | 第39-46页 |
2.1 小鼠乳鼠心肌细胞的分离与原代培养 | 第39页 |
2.2 细胞免疫荧光技术 | 第39-40页 |
2.3 蔗糖密度梯度离心 | 第40页 |
2.4 超速离心后细胞各层蛋白的提取: | 第40-41页 |
2.5 Western Blot实验 | 第41-43页 |
2.6 细胞免疫共沉淀(Co-IP) | 第43-46页 |
3 结果 | 第46-48页 |
3.1 免疫荧光检测Cav-1/3 及LRRC8A在细胞膜上的分布 | 第46-47页 |
3.2 蔗糖密度梯度离心检测二者的分布及定位关系 | 第47页 |
3.3 免疫共沉淀实验结果 | 第47-48页 |
4 讨论 | 第48-50页 |
第二部分:Caveolin-1/3 对低渗刺激VSOR Cl~-通道功能的影响 | 第50-71页 |
1 材料 | 第50-53页 |
1.1 实验动物 | 第50页 |
1.2 实验主要试剂和药品 | 第50-51页 |
1.3 实验主要仪器 | 第51-52页 |
1.4 试剂配制 | 第52-53页 |
2 方法 | 第53-61页 |
2.1 细胞培养 | 第53-54页 |
2.2 H9C2细胞瞬时转染 | 第54-55页 |
2.3 验证siRNACav-1/3 干扰效果 | 第55页 |
2.4 qRT-PCR实验步骤 | 第55-57页 |
2.5 细胞体积的检测 | 第57页 |
2.6 细胞内氯离子浓度的检测 | 第57-58页 |
2.7 电生理学实验 | 第58-60页 |
2.8 实验分组 | 第60页 |
2.9 统计学处理 | 第60-61页 |
3 结果 | 第61-69页 |
3.1 caveolin-1/3 对原代培养心肌细胞Cl~-浓度的影响 | 第61-62页 |
3.2 caveolin-1/3 对低渗刺激肿胀心肌细胞体积变化的影响 | 第62-63页 |
3.3 含LRRC8A siRNA的腺病毒干扰LRRC8A表达效率的检测 | 第63页 |
3.4 电生理学实验结果 | 第63-69页 |
4 讨论 | 第69-71页 |
第三部分:探讨Caveolin-1 对LRRC8A蛋白的调控作用 | 第71-81页 |
1 材料 | 第71-73页 |
1.1 实验动物 | 第71页 |
1.2 实验主要试剂与药品 | 第71-72页 |
1.3 实验主要仪器 | 第72页 |
1.4 PCR扩增引物 | 第72页 |
1.5 试剂配制 | 第72-73页 |
2 方法 | 第73-76页 |
2.1 H9C2心肌细胞系的传代培养 | 第73页 |
2.2 H9C2细胞的瞬时转染 | 第73页 |
2.3 HEK 293 细胞的瞬时转染 | 第73-74页 |
2.4 细胞总蛋白的提取与定量 | 第74页 |
2.5 细胞膜蛋白的提取及分离 | 第74页 |
2.6 pCMV-myc-Cav-1 真核表达载体的构建 | 第74-76页 |
2.7 Western-blot检测目的蛋白及膜蛋白表达水平 | 第76页 |
2.8 qRT-PCR检测mRNA水平 | 第76页 |
2.9 统计学处理 | 第76页 |
3 结果 | 第76-79页 |
3.1 siRNA沉默Cav-3 RNA及蛋白水平的检测 | 第76-77页 |
3.2 siRNA沉默Cav-1 RNA及蛋白水平的检测 | 第77页 |
3.3 Cav-1 基因沉默后对LRRC8A膜蛋白表达水平的影响 | 第77-78页 |
3.4 构建pCMV-myc-Cav-1 的真核表达载体 | 第78-79页 |
3.5 Cav-1 过表达对LRRC8A膜蛋白表达水平的影响 | 第79页 |
4 讨论 | 第79-81页 |
小结 | 第81-82页 |
参考文献 | 第82-96页 |
附录 | 第96-102页 |
个人简历和研究成果 | 第102-103页 |
致谢 | 第103页 |