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窖蛋白caveolin-1/3对心肌细胞容积敏感性氯离子通道功能的影响

缩略语表第6-8页
中文摘要第8-12页
Abstract第12-16页
前言第17-19页
文献回顾第19-35页
第一部分:Caveolin-1/3 与LRRC8A在心肌细胞膜上的分布及定位第35-50页
    1 材料第35-39页
        1.1 实验动物第35页
        1.2 实验主要试剂与药品第35-36页
        1.3 实验主要仪器第36-37页
        1.4 试剂配制第37-39页
    2 方法第39-46页
        2.1 小鼠乳鼠心肌细胞的分离与原代培养第39页
        2.2 细胞免疫荧光技术第39-40页
        2.3 蔗糖密度梯度离心第40页
        2.4 超速离心后细胞各层蛋白的提取:第40-41页
        2.5 Western Blot实验第41-43页
        2.6 细胞免疫共沉淀(Co-IP)第43-46页
    3 结果第46-48页
        3.1 免疫荧光检测Cav-1/3 及LRRC8A在细胞膜上的分布第46-47页
        3.2 蔗糖密度梯度离心检测二者的分布及定位关系第47页
        3.3 免疫共沉淀实验结果第47-48页
    4 讨论第48-50页
第二部分:Caveolin-1/3 对低渗刺激VSOR Cl~-通道功能的影响第50-71页
    1 材料第50-53页
        1.1 实验动物第50页
        1.2 实验主要试剂和药品第50-51页
        1.3 实验主要仪器第51-52页
        1.4 试剂配制第52-53页
    2 方法第53-61页
        2.1 细胞培养第53-54页
        2.2 H9C2细胞瞬时转染第54-55页
        2.3 验证siRNACav-1/3 干扰效果第55页
        2.4 qRT-PCR实验步骤第55-57页
        2.5 细胞体积的检测第57页
        2.6 细胞内氯离子浓度的检测第57-58页
        2.7 电生理学实验第58-60页
        2.8 实验分组第60页
        2.9 统计学处理第60-61页
    3 结果第61-69页
        3.1 caveolin-1/3 对原代培养心肌细胞Cl~-浓度的影响第61-62页
        3.2 caveolin-1/3 对低渗刺激肿胀心肌细胞体积变化的影响第62-63页
        3.3 含LRRC8A siRNA的腺病毒干扰LRRC8A表达效率的检测第63页
        3.4 电生理学实验结果第63-69页
    4 讨论第69-71页
第三部分:探讨Caveolin-1 对LRRC8A蛋白的调控作用第71-81页
    1 材料第71-73页
        1.1 实验动物第71页
        1.2 实验主要试剂与药品第71-72页
        1.3 实验主要仪器第72页
        1.4 PCR扩增引物第72页
        1.5 试剂配制第72-73页
    2 方法第73-76页
        2.1 H9C2心肌细胞系的传代培养第73页
        2.2 H9C2细胞的瞬时转染第73页
        2.3 HEK 293 细胞的瞬时转染第73-74页
        2.4 细胞总蛋白的提取与定量第74页
        2.5 细胞膜蛋白的提取及分离第74页
        2.6 pCMV-myc-Cav-1 真核表达载体的构建第74-76页
        2.7 Western-blot检测目的蛋白及膜蛋白表达水平第76页
        2.8 qRT-PCR检测mRNA水平第76页
        2.9 统计学处理第76页
    3 结果第76-79页
        3.1 siRNA沉默Cav-3 RNA及蛋白水平的检测第76-77页
        3.2 siRNA沉默Cav-1 RNA及蛋白水平的检测第77页
        3.3 Cav-1 基因沉默后对LRRC8A膜蛋白表达水平的影响第77-78页
        3.4 构建pCMV-myc-Cav-1 的真核表达载体第78-79页
        3.5 Cav-1 过表达对LRRC8A膜蛋白表达水平的影响第79页
    4 讨论第79-81页
小结第81-82页
参考文献第82-96页
附录第96-102页
个人简历和研究成果第102-103页
致谢第103页

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