| 目录 | 第1-7页 |
| 图表索引 | 第7-8页 |
| 中英文缩略词对照 | 第8-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 第一部分 PIP5KL1的原核表达与纯化及多克隆抗体制备 | 第13-37页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 材料与方法 | 第15-30页 |
| 一、实验材料 | 第15-20页 |
| 1 菌种与质粒 | 第15页 |
| 2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 3 重要试剂的配制 | 第16-19页 |
| 4 实验动物 | 第19页 |
| 5 主要仪器 | 第19-20页 |
| 二、实验方法 | 第20-30页 |
| 1 pET32-PIP5KL1表达载体的构建和鉴定 | 第20-25页 |
| 2 PIP5KL1蛋白的诱导表达及分离提纯与鉴定 | 第25-27页 |
| 3 PIP5KL1多克隆抗体的制备 | 第27-30页 |
| 结果 | 第30-34页 |
| 1 pET32a-PIP5KL1重组质粒的构建及鉴定 | 第30页 |
| 2 pET32a-PIP5KL1融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第30-31页 |
| 3 表达产物的可溶性分析 | 第31-32页 |
| 4 包涵体的变性、复性、纯化及鉴定 | 第32页 |
| 5 兔抗PIP5KL1抗血清的鉴定 | 第32-34页 |
| 讨论 | 第34-37页 |
| 第二部分 PIP5KL1基因在真核细胞中的表达及其对细胞恶性行为的影响 | 第37-64页 |
| 前言 | 第37-38页 |
| 材料与方法 | 第38-47页 |
| 一、实验材料 | 第38-40页 |
| 1 质粒、细胞株及实验动物 | 第38页 |
| 2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3 主要仪器及用品 | 第39页 |
| 4 重要试剂的配制 | 第39-40页 |
| 二、实验方法 | 第40-47页 |
| 1 pcDNA3.1-PIP5KL1和pEGFPC1-PIP5KL1重组体的构建 | 第40页 |
| 2 细胞培养和冻存 | 第40-41页 |
| 3 半定量RT-PCR | 第41-43页 |
| 4 Western blot | 第43页 |
| 5 细胞转染用质粒的提取 | 第43-44页 |
| 6 脂质体介导的真核细胞转染 | 第44页 |
| 7 稳定克隆的筛选 | 第44-45页 |
| 8 细胞免疫荧光 | 第45页 |
| 9 肿瘤细胞生物学功能分析实验方法 | 第45-46页 |
| 10 流式细胞仪检测细胞凋亡(FACS) | 第46页 |
| 11 裸鼠致瘤实验 | 第46页 |
| 12 统计学分析 | 第46-47页 |
| 结果 | 第47-61页 |
| 1 PIP5KL1在真核细胞Hela中的表达 | 第47-49页 |
| 2 PIP5KL1基因对Hela细胞增殖迁移的影响 | 第49-52页 |
| 3 PIP5KL1基因对Hela细胞凋亡的影响 | 第52-53页 |
| 4 PIP5KL1基因对Hela细胞裸鼠致瘤能力的影响 | 第53-54页 |
| 5 PIP5KL1在真核细胞BGC823中的表达 | 第54-56页 |
| 6 PIP5KL1基因对BGC823细胞体外增殖能力的影响 | 第56-57页 |
| 7 PIP5KL1基因对BGC823细胞体外迁移能力的影响 | 第57-59页 |
| 8 PIP5KL1基因对BGC823细胞凋亡的影响 | 第59-61页 |
| 讨论 | 第61-64页 |
| 第三部分 PIP5KL1基因在真核细胞中的表达及其对细胞恶性行为的影响 | 第64-82页 |
| 前言 | 第64-65页 |
| 材料与方法 | 第65-74页 |
| 一、实验材料 | 第65-71页 |
| 1 试剂盒 | 第65页 |
| 2 抗体 | 第65页 |
| 3 组织芯片 | 第65-70页 |
| 4 基因芯片 | 第70页 |
| 5 主要分析软件 | 第70-71页 |
| 二、实验方法 | 第71-74页 |
| 1 免疫组化 | 第71-72页 |
| 2 Western blot | 第72页 |
| 3 RNA提取及荧光标记 | 第72-73页 |
| 4 芯片图像的采集与数据分析 | 第73-74页 |
| 结果 | 第74-79页 |
| 1 PIP5KL1在多种正常及癌组织中的表达 | 第74页 |
| 2 PIP5KL1在正常胃组织中的表达强于胃癌组织 | 第74-76页 |
| 3 PIP5KL1高表达抑制BGC823细胞Akt1的活化 | 第76-77页 |
| 4 基因芯片结果分析 | 第77-79页 |
| 讨论 | 第79-82页 |
| 小结 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 文献综述 | 第87-123页 |
| 致谢 | 第123-124页 |
| 课题资助基金 | 第124-125页 |
| 论文发表情况 | 第125-126页 |
