| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-14页 |
| 2 材料和方法 | 第14-30页 |
| ·试验材料 | 第14-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第14页 |
| ·PCR 引物 | 第14-15页 |
| ·培养基 | 第15-18页 |
| ·缓冲液及试剂 | 第18-19页 |
| ·分子量标记 | 第19-20页 |
| ·各种氨基酸和实验用酶 | 第20页 |
| ·试剂盒 | 第20页 |
| ·抗生素 | 第20-21页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-30页 |
| ·链霉菌菌种保存 | 第21页 |
| ·链霉菌孢子悬浮液的制备 | 第21-22页 |
| ·碱裂解法提取链霉菌质粒 | 第22页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第22-23页 |
| ·链霉菌总DNA 的少量制备 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增测序 | 第24-25页 |
| ·DNA 片段的回收 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增片段的 BLAST 分析 | 第26页 |
| ·载体的去磷酸化 | 第26页 |
| ·DNA 连接 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及质粒热激转化 | 第26-27页 |
| ·链霉菌-大肠杆菌之间的接合转移 | 第27页 |
| ·基因功能研究 | 第27-28页 |
| ·非放射性标记探针及杂交 | 第28-29页 |
| ·发酵液培养 | 第29页 |
| ·抗生素生物检测 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-50页 |
| ·玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 接合转移系统的建立和优化 | 第30-33页 |
| ·玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 接合转移体系最优条件 | 第30-31页 |
| ·质粒在玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 接合转移转化子中的稳定性检测 | 第31页 |
| ·pKC1139 接合转移转化子的检测 | 第31-32页 |
| ·pSET152 接合转移转化子的检测 | 第32-33页 |
| ·玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 中nsdA_(mgh) 基因克隆及序列分析 | 第33-39页 |
| ·PCR 克隆nsdA_(mgh) 基因 | 第33-34页 |
| ·目的DNA 片段的克隆与测序 | 第34页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的核苷酸序列同源性比对 | 第34-35页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的氨基酸序列同源性比对 | 第35-36页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的氨基酸序列分析 | 第36-38页 |
| ·Dot- blotting 验证nsdA_(mgh) 基因 | 第38-39页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的中断 | 第39-50页 |
| ·基因中断和基因置换的基本原理 | 第39-40页 |
| ·nsdA_(mgh) 单交换载体的构建 | 第40-41页 |
| ·用于nsdA_(mgh) 基因双交换的重组质粒的构建 | 第41-43页 |
| ·中断载体导入到玫瑰黄链霉菌 Men-myco-93-63 | 第43-45页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因重组单交换载体的插入失活 | 第45-46页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因重组双交换载体的插入失活 | 第46-47页 |
| ·nsdA_(mgh) 阻断突变株的PCR 验证 | 第47页 |
| ·nsdA_(mgh) 阻断突变株的 Dot-blotting 验证 | 第47-49页 |
| ·nsdA_(mgh) 阻断突变株的稳定性检测 | 第49页 |
| ·nsdA_(mgh) 阻断突变株代谢产物的生物活性检测 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-54页 |
| ·玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63 的接合转移转化体系 | 第50-51页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的克隆 | 第51-52页 |
| ·nsdA_(mgh) 基因的阻断 | 第52-53页 |
| ·存在的问题及下一步研究方向 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
