| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一部分 前言 | 第10-16页 |
| ·研究背景 | 第10-13页 |
| ·国内外研究现状 | 第13-15页 |
| ·研究目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二部分 颗粒溶素和穿孔素基因的克隆 | 第16-31页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-24页 |
| ·人外周血单个核细胞的分离及体外培养 | 第17-18页 |
| ·颗粒溶素和穿孔素基因片段的获取 | 第18-21页 |
| ·pMD-GNLY和pMD-PFP的构建 | 第21-24页 |
| ·结果 | 第24-30页 |
| ·外周血单个核细胞的体外培养 | 第24页 |
| ·RT-PCR获取目的基因 | 第24-25页 |
| ·pMD-GNLY和pMD-PFP的鉴定 | 第25-30页 |
| ·讨论 | 第30-31页 |
| 第三部分 颗粒溶素的原核表达 | 第31-44页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·PCR获取目的基因 | 第33页 |
| ·pMD-GNLY9K和pMD-GNLY15K的构建 | 第33-34页 |
| ·pET-GNLY9K和pET-GNLY15K的构建 | 第34页 |
| ·pET-GNLY9K和pET-GNLY15K转化至Rosetta(DE3)菌 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第35-36页 |
| ·Western-blotting检测 | 第36-37页 |
| ·结果 | 第37-41页 |
| ·PCR获取目的基因 | 第37页 |
| ·pMD-GNLY9K和pMD-GNLY15K的鉴定 | 第37-38页 |
| ·pET-GNLY9K和pET-GNLY15K的鉴定 | 第38页 |
| ·融合蛋白的诱导表达及表达条件的优化 | 第38-41页 |
| ·Western-blotting检测 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第四部分 颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对A549细胞的影响 | 第44-58页 |
| ·材料 | 第44-46页 |
| ·方法 | 第46-52页 |
| ·PCR获取目的基因 | 第46-47页 |
| ·pMD-GNLY9和pMD-PFP2a的构建 | 第47页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·重组质粒的纯化 | 第49页 |
| ·重组质粒的细胞转染及表达 | 第49-52页 |
| ·统计 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-56页 |
| ·PCR获取目的基因 | 第52页 |
| ·pMD-GNLY9和pMD-PFP2a的鉴定 | 第52-53页 |
| ·真核表达质粒的鉴定 | 第53页 |
| ·重组质粒的细胞转染及表达 | 第53-56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 结论 | 第58-59页 |
| 主要参考文献 | 第59-64页 |
| 攻读学位期间撰写的学术论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录:英文缩略词简表 | 第66-68页 |
