| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1. 前言 | 第13-26页 |
| ·水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）的研究概况 | 第13-17页 |
| ·水稻条纹叶枯病的发生及危害 | 第13页 |
| ·水稻条纹叶枯病的病害症状 | 第13-14页 |
| ·水稻条纹病毒的病原性质及传毒介体 | 第14页 |
| ·水稻条纹叶枯病的防治策略 | 第14-15页 |
| ·RSV 的基因组结构 | 第15-17页 |
| ·酵母双杂交系统及其在植物病毒研究中的应用 | 第17-20页 |
| ·酵母双杂交系统简介 | 第17-18页 |
| ·酵母双杂交系统的操作流程 | 第18页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第18-19页 |
| ·酵母双杂交系统的新发展 | 第19-20页 |
| ·荧光定量PCR 技术及应用 | 第20-23页 |
| ·荧光定量PCR 简介及原理 | 第20-22页 |
| ·荧光定量PCR 特点 | 第22-23页 |
| ·荧光定量PCR 应用 | 第23页 |
| ·原核表达技术及应用 | 第23-24页 |
| ·原核表达系统简介 | 第23-24页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2. 利用酵母双杂交系统对互作蛋白再验证 | 第26-43页 |
| ·材料与方法 | 第26-35页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·供试材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·PCR 引物 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·水稻叶片总RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因 | 第27-28页 |
| ·CB18、NB17 目的基因片段的回收纯化 | 第28-29页 |
| ·目的片段与pMD18-T 克隆载体连接 | 第29页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α | 第29-30页 |
| ·阳性克隆的鉴定筛选 | 第30-32页 |
| ·CB18,NB17 酵母表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的测序鉴定及互作蛋白的序列比对分析 | 第33页 |
| ·两质粒共转化酵母细胞 | 第33-34页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-40页 |
| ·CB18,NB17 基因的PCR 扩增 | 第35页 |
| ·CB18、NB17 基因的克隆 | 第35-37页 |
| ·CB18,NB17 基因酵母表达载体的构建 | 第37-38页 |
| ·两蛋白互作的检测 | 第38-40页 |
| ·小结与讨论 | 第40-43页 |
| 3 利用荧光定量PCR 技术检测CB18,NB17 mRNA 表达情况 | 第43-53页 |
| ·材料与方法 | 第43-45页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·供试材料 | 第43页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·荧光定量PCR 引物的设计 | 第43页 |
| ·RNA 的抽提和质量检测 | 第43-44页 |
| ·cDNA 的合成 | 第44页 |
| ·目的基因和内参基因标准曲线的建立 | 第44-45页 |
| ·荧光定量PCR 检测不同样品中目的基因的表达量 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-51页 |
| ·样品总RNA 的质量检测 | 第45-46页 |
| ·目的基因和内参基因的融解曲线 | 第46-47页 |
| ·目的基因和内参基因的扩增曲线 | 第47页 |
| ·目的基因和内参基因的标准曲线 | 第47-48页 |
| ·目的基因和内参基因的原始定量 | 第48-50页 |
| ·目的基因的相对定量 | 第50-51页 |
| ·小结和讨论 | 第51-53页 |
| 4. CB18 抗血清制备及western-blot 检测植株体 | 第53-66页 |
| ·材料与方法 | 第53-58页 |
| ·材料 | 第53页 |
| ·供试材料 | 第53页 |
| ·试验动物 | 第53页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·PCR 引物 | 第53页 |
| ·试验方法 | 第53-58页 |
| ·PCR 扩增CB18 基因 | 第53-54页 |
| ·PMD-CB18 克隆载体的构建 | 第54页 |
| ·pGEX-CB18 原核表达载体的构建 | 第54页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3） | 第54页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第54-55页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳 | 第55页 |
| ·表达产物的超声波破碎和可溶性分析 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白特异性抗血清的制备及保存 | 第56页 |
| ·间接ELISA 法（Indirect enzyme linked immunoassay）测定抗血清效价 | 第56-57页 |
| ·Western blot 检测抗血清特异性 | 第57页 |
| ·水稻蛋白的提取以及浓度的测定 | 第57-58页 |
| ·Western blot 检测病RSV 侵染后水稻与健康水稻CB18 蛋白表达量的差异 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-64页 |
| ·PCR 扩增CB18 基因 | 第58-59页 |
| ·PMD-CB18 克隆载体的构建 | 第59-60页 |
| ·pGEX-CB18 原核表达载体的构建 | 第60页 |
| ·重组质粒转化宿主菌BL21（DE3）的鉴定 | 第60-61页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第61-62页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第62页 |
| ·抗血清的效价 | 第62页 |
| ·抗血清特异性评价 | 第62-63页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第63-64页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第63-64页 |
| ·测定RSV 侵染后水稻与健康水稻蛋白吸光值大小 | 第64页 |
| ·western blot 检测RSV 侵染后水稻与健康水稻中C818 表达量差异 | 第64页 |
| ·小结与讨论 | 第64-66页 |
| 5. RSV NS2 蛋白与RSV 编码的其他功能蛋白互作情况检测 | 第66-79页 |
| ·材料和方法 | 第66-69页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·供试毒源 | 第66页 |
| ·菌株和质粒 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·PCR 引物 | 第66页 |
| ·试验方法 | 第66-69页 |
| ·水稻病叶总RNA 的提取 | 第66-67页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因 | 第67页 |
| ·目的基因的克隆 | 第67页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第67-68页 |
| ·重组质粒的自激活活性检测 | 第68页 |
| ·两重组质粒共转化酵母细胞 | 第68-69页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-76页 |
| ·RSV NS2 基因的PCR 扩增 | 第69-70页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第70-71页 |
| ·重组酵母表达载体的鉴定 | 第71-72页 |
| ·酵母载体重组质粒PGAD-CP,PGBK-CP 的酶切和回收结果 | 第71页 |
| ·重组酵母表达载体的PCR 与酶切验证 | 第71-72页 |
| ·阳性克隆的测序鉴定 | 第72页 |
| ·重组质粒自激活活性检测 | 第72-74页 |
| ·蛋白自身互作的检测 | 第74-75页 |
| ·N52 与RSV 编码的其他功能蛋白的互作检测 | 第75-76页 |
| ·小结与讨论 | 第76-79页 |
| 小结 | 第79-80页 |
| 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 附录1 缩略语及含义 | 第87-89页 |
| 附录2 所用载体图谱 | 第89-92页 |
| 附录3 攻硕期间发表文章及拟投稿文章 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
