抗CDK4人源胞内单链抗体在肿瘤细胞中的表达及生物活性分析
| 提要 | 第1-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-21页 |
| ·肿瘤的基因治疗 | 第8-15页 |
| ·反义技术 | 第8-11页 |
| ·RNA 干扰技术 | 第11-12页 |
| ·胞内抗体技术 | 第12-15页 |
| ·CDK4 与肿瘤 | 第15-19页 |
| ·CDK4 的发现及生物学特点 | 第16页 |
| ·CDK4 蛋白在细胞周期调控中的作用 | 第16-17页 |
| ·CDK4 的活性调节机制 | 第17-18页 |
| ·CDK4 与肿瘤 | 第18-19页 |
| ·本研究的立题目的与意义 | 第19-21页 |
| 第二章 实验研究 | 第21-40页 |
| ·实验材料 | 第21-27页 |
| ·菌株、质粒和细胞株 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21-22页 |
| ·主要试剂与溶液 | 第22-26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·计算机辅助工具 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| ·真核表达质粒pNLS-AK 的构建 | 第27-33页 |
| ·表达质粒pNLS-AK 的体外活性分析 | 第33-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-55页 |
| ·表达质粒 pNLS-AK 的构建与鉴定 | 第40页 |
| ·NLS-AK 在肿瘤细胞中的瞬时表达及分析 | 第40-42页 |
| ·RT-PCR 检测NLS-AK 的表达 | 第40-42页 |
| ·NLS-AK 的胞内表达及定位分析 | 第42页 |
| ·Western-blot 分析 | 第42页 |
| ·pNLS-AK 稳定转染的肿瘤细胞的鉴定 | 第42-46页 |
| ·RT-PCR 检测NLS-AK 的表达 | 第42-46页 |
| ·间接免疫荧光实验分析 | 第46页 |
| ·Western-blot 分析 | 第46页 |
| ·胞内抗体NLS-AK 的免疫共沉淀实验 | 第46-48页 |
| ·NLS-AK 抑制肿瘤细胞生长 | 第48-49页 |
| ·NLS-AK 引起肿瘤细胞的细胞周期阻滞 | 第49页 |
| ·NLS-AK 能够诱导肿瘤细胞凋亡 | 第49-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-58页 |
| ·肿瘤基因治疗靶点的选择 | 第55页 |
| ·细胞核定位型胞内抗体NLS-AK 的生物学活性 | 第55-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-67页 |
| 中文摘要 | 第67-71页 |
| ABSTRACT | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
